新型PreS/S基因突变毒株在隐匿性HBV感染中的作用机制及在乙肝疫苗接种人群中传播风险的研究

Occult HBV infection (OBI) is associated with liver disease progression, and may lead to missed diagnosis and subsequent HBV infection caused by transfusion and transplantation. By sequencing sreening PreS / S gene from a large number of patients’ samples, we identified 14 cloned PreS / S mutant strains from typical OBI cases, including strains with large PreS1 deletions+short segment insertion and sG145R in the determinant “a”, the start coding mutation of PreS2+addional glycosylation mutation in the determinant “a”, and so on. This study aimed to define the phenotypic characteristics and mechanisms in OBI occurrence of these novel mutant strains, and to assess their transmission risk in hepatitis B vaccinated population. The study protocol is as follows. 1) To continue the screening and follow-up of OBI patients, and to analyze the evolution of the mutant strains. 2) In cell model, to analyse novel mutations’ impact on HBV viral replication, transcription, expression and secretion, promoter activity, glycosylation and endoplasmic reticulum stress for systemically revealing the role of mutations in OBI occurrence. 3) To assess binding activity and reactivity of HBsAg mutant strains with the anti-HBs obtained from hepatitis B vaccinated popople. 4) To test whether the novel mutated HBsAg could be detected by mainstream HBsAg diagnistic reagents. The applicant and research group have solid research foundation, with advantages in key technological and sample resources. The results have great value for the management of HBV infection.

隐匿性HBV感染(OBI)与肝脏疾病进展相关，并可致漏检造成输血传播。我们前期通过大样本PreS/S基因测序筛查从典型OBI病例中克隆到14种新型PreS/S突变毒株，突变形式包括PreS1大片段缺失+a决定簇区短片段插入+sG145R、前S2起始突变+a决定簇新增糖基化位点联合突变等。本研究旨在明确这些新型突变毒株的表型特点和在OBI中的作用机制，并评估其在乙肝疫苗接种人群中的传播风险。方案：1)继续筛查与随访OBI患者，分析新型突变毒株演变特点；2)在细胞模型中分析各种新型突变对病毒复制、转录、表达分泌、启动子活性、糖基化及对细胞内质网应激的影响，深入揭示其在OBI发生中的作用机制；3) 检测各种突变HBsAg对乙肝疫苗接种人群抗HBs的结合力和反应性；4)测试突变HBsAg能否被主流诊断试剂检出。申报人和课题组研究基础扎实，具关键技术和样本资源优势。结果对HBV感染防治有重要意义。

隐匿性HBV感染（OBI）是指血清HBsAg阴性而血清和（或）肝组织中可以检测到HBV DNA。OBI与HBV感染漏诊、输血传播、乙肝再激活等密切相关。免疫逃逸相关突变指可引起S区HBsAg水平显著下降的突变。本研究旨以大样本患者分析为基础，以前期OBI患者中检出的多种新型免疫逃逸突变毒株为突破口，阐明免疫逃逸相关突变对临床OBI发生的影响、突变HBsAg对HBsAg试剂检测的影响及对乙肝疫苗诱导抗体的反应性的影响。. 本研究主要取得了以下发现：1. 通过迄今临床最大样本量的分析明确了OBI的临床检出率与检出特点，并通过序列分析证实了S区免疫逃逸相关突变与OBI的发生密切相关。2. 首次对我国北方地区中心血站的大样本献血员分析，证实OBI献血员中S区免疫逃逸相关突变的检出率显著高于对照组。3. 明确了14种新型HBV前S/S基因突变株的HBsAg和HBV复制水平特点，证实了前S基因大片段缺少对启动子活性有显著抑制。4. 对重点研究的8种新型S区免疫逃逸突变株的病毒学特性进行了系统研究，明确了抗原性降低是赋予这些新型突变株免疫逃逸特性的主要因素。5. 完成了12种HBsAg检测试剂对9种突变HBsAg的检测能力分析，发现包括临床常用的罗氏和雅培等在内的11种试剂对新型突变HBsAg的检测能力均有不同程度下降。6. 完成了对12种抗HBs抗体对各种突变HBsAg反应性的检测，筛选出了1种对突变HBsAg有较好反应性的抗体。7. 初步结果显示突变HBsAg与HB疫苗接种抗体的反应性无显著下降。. 发表论文21篇，包括9篇SCI论文，IF累计为32.2，其中1篇论文被2019版国际OBI生物与临床影响专家共识引用；培养研究生6名；合作获得省部级科技进步二等奖1项（2018-6）；在国内外学会议交流报告研究12篇次，2次在亚太地区肝病学会大会发言获奖。本研究总体上完成了计划任务目标。.