左归丸对生精障碍大鼠睾丸SCF/c-kit系统、附睾肉碱、血清InhB的调控作用研究

"Kidney storing essence and controlling reproduction", the effect on male reproduction is showed on the production and maturation of sperm, in which the method of tonifying kidney for male infertility may play an important role. the production of sperm, which is happened in testcle, has a deep relationship with the SCF/c-kit, reproduction and endocrine system, while the maturation of sperm token place in epididymis is deeply related to carnitine..We assumed that part of the mechanism of tonifying kidney for male intertility is: 1.affect the production of sperm through regulating the SCF/c-kit, reproduction and endocrine system; 2.control the amount of carnitine to promote the mature of sperm. So our team designed a experiment to imitate the modole of sperm lesion letdown in mice by pouring triptergium wilfordii into the stomach of mice, and intervened the modole with the representatives fomula of tonifying kidney:zuoguiwan We randomly classified the SD male mice into three group: normal group, modole group, zuoguiwan goup , and we respectively designed experiment of precaution, protection and treatment to observe the effect of zuoguiwan on testcle SCF/c-kit system, reproduction-endocrine system, epididymis carnitine, blood serum InB,etc. probing the menchanism of tonifying kidney treating male intertility, providing scientific basis for the clinical treatment of oligospermia and asthenozoospermia.

中医认为"肾藏精、主生殖"，其在男性生殖方面的作用体现在精子的发生与成熟两个方面，补肾法治疗男性不育主要可能是作用于这两个方面。精子在睾丸发生与SCF/c-kit系统、生殖内分泌关系密切，精子在附睾成熟与肉碱关系密切。.我们设想，补肾法治疗男性不育的部分机制是：1.调节SCF/c-kit系统、生殖内分泌系统影响精子发生；2.调节肉碱水平促进精子成熟。因此我们在课题组以往温肾填精法治疗男性不育症的临床、实验基础上，进一步设计实验，用雷公藤多苷灌胃复制生精障碍大鼠模型，以左归丸作为养阴填精的代表方对模型进行干预。将SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组、左归丸组，分别设计预防实验、保护实验、治疗实验，观察左归丸对各组大鼠睾丸SCF/c-kit系统、生殖内分泌、附睾肉毒碱、血清InB等方面的影响。探讨补肾法治疗男性不育症的肾主生殖机理。为临床治疗少、弱精症提供科学依据。

近年来，随着传统生活方式的改变，产生了诸如精神压抑、暴饮暴食等负面因素，直接导致男性精子质量水平普遍下降，男性生育能力下降明显，女性自然怀孕的几率也随之降低。由此引发了包括男性心理、家庭和谐、社会和谐等一系列问题。同时，国家全面放开二胎政策，人们普遍对生育充满了迫切的需求。因此，在此历史背景之下，如何有效提高男性生育能力成为当下的热点话题。目前在西医临床诊治方面，除去辅助生殖技术以及病因明确的患者，临床上尚无男性不育症的有效治疗方法。并且辅助生殖技术具有费用高昂、成功率低等局限性。中医药治疗本病历史悠久，基础坚实，且临床疗效明显。这种情况下，如何充分挖掘本病的中医药特色疗法已经成为一个重要的课题。.我们首先探索了使用雷公藤多苷制备少弱精子症大鼠模型，研究其用药剂量及时间的最佳组合，制备相对合理的少弱精子症模型；之后在此模型基础之上，设计保护实验和治疗实验，每个实验包含正常组、模型组以及治疗组，综合评价左归丸对少弱精子型模型大鼠脏器系数、精液质量、性激素水平、附睾肉毒碱、抑制素B水平的影响，从药效学角度对左归丸的治疗效果进行评价；最后，从蛋白及mRNA表达角度，釆用免疫组织化学、western blot 以及Real-Time PCR检测技术，对保护实验以及治疗实验中各组睾丸组织Bax、Bal-2、SCF、Ki67蛋白及mRNA表达水平进行检测，对左归丸可能的抗凋亡及促增殖的作用机制进行定性及定量分析。.综合考虑造模时间、经济成本以及大鼠的自我恢复情况，采用40mg/（Kg▪d）的雷公藤多苷干预4周后可以得到少弱精子型大鼠模型。左归丸可以有效改善模型大鼠一般状态、生殖器官脏器系数、精液质量、睾酮水平、血清抑制素B水平，具有明显的保护及治疗作用。同时，左归丸可以有效调控模型大鼠Bax、Bcl-2、SCF、Ki67蛋白及其mRNA的表达，具有明显的抑制生精细胞凋亡、促进生精细胞增殖的作用。