左归丸对衰老大鼠骨髓间充质干细胞的调控作用及机理研究

Today's society is entering the aging stage, and the study of aging interventions has become a global social and economic problem. Traditional Chinese medicine has a long history of research on aging and aging interventions, but most of these studies are lack of really powerful experimental evidence and mechanisms research..The Zuogui Pill is a classic prescription of invigorating kidney and nourishing essence, commonly used in anti-aging clinically. In the previous study, applicants found that Zuogui Pill can promote the proliferation of bone marrow mesenchymal stem cells (MSC) from weak kidney rats, affecting these cells differentiation capacity..According to "essence and blood have the same source" and "stem cells have the same properties as congenital essence", in vitro and in vivo experiments, we use cell biology, morphology, imaging, and molecular biology techniques, to discuss the possible mechanisms of delaying aging of MSC by Zuogui Pill, and anti-aging mechanism of invigorating kidney and nourishing essence from the perspective of stem cell research. We plan to analysis the relation of changes of MSC morphology, proliferation and differentiation capacity, the transplantation for the repair capacity, with p16Ink4arRb、p21Cip1 /Waf1、p53、TGF-β1 genes and the Wnt / beta-catenin signaling pathway, is to provide innovative ideas for revealing the mechanism of anti-aging by traditional Chinese medicine, and provide strong experimental evidence for using in clinical anti-aging by Zuogui Pill.

当今社会正步入老龄化阶段，对于衰老干预措施的研究已经成为一项全球性的社会和经济问题。中医药对衰老和衰老干预措施的研究历史源远流长，但多数缺乏确实有力的实验证据与机制研究。.左归丸为补肾益精的要药，是临床常用于抗衰老的经典名方。申请者在前期的研究中发现，左归丸可促进肾虚大鼠骨髓间充质干细胞（MSC）的增殖，影响其分化能力的改变。本课题依据"肾精亏虚"的衰老理论及"干细胞具先天之精属性"理论，运用细胞生物学、形态学、影像学、分子生物学等技术方法，进行体外及整体动物实验，从MSC形态学、增殖分化能力、移植修复能力的改变与细胞衰老相关基因及Wnt/β-catenin信号通路相关性分析等方面探讨左归丸延缓MSC衰老的可能机制，从干细胞角度研究补肾益精法抗衰老的作用机理。.为深入揭示中医药延缓衰老的机制研究提供创新性的思路，为左归丸应用于临床抗衰老的保健与治疗提供有力的实验依据。

中医药对衰老和衰老干预措施的研究历史源远流长，以其独特的辨证论治体系与可靠的疗效在延缓衰老的研究中具有重要的地位，但多数缺乏确实有力的实验证据与机制研究。课题组在中医学“肾精亏虚”的衰老理论及“干细胞具先天之精属性，是先天之精在细胞层次的存在形式”理论的基础上，结合现代医学研究进展，提出中西医结合衰老的新假说：肾精亏虚即干细胞与其调控系统的衰老，是人体衰老的根本原因。.我们利用动物造模、MTT、电镜等多种技术方法从形态学、增殖分化能力、在体转分化修复能力方面研究D-半乳糖衰老模型大鼠MSC多层次的变化，及补肾益精经典方左归丸对这些变化的影响。并运用PT-PCR、定量PCR、Western Blot、基因芯片等分子生物学技术，探索旁分泌细胞因子、细胞衰老相关基因、Wnt/β-catenin信号通路与各组大鼠MSC生物性状差异的相关性，深入探讨左归丸对衰老大鼠MSC的调控作用。.结果发现左归丸能改善衰老细胞的形态学变化。衰老大鼠增殖能力减弱，左归丸能改善衰老大鼠增殖能力。衰老大鼠骨向分化能力降低，脂向分化能力增强。左归丸水煎液一定浓度时可促进衰老大鼠向成骨细胞分化，同时可抑制其向成脂细胞分化。左归丸具有显著延缓干细胞衰老作用，可能为通过抑制Kremen2和促进Wnt3a途径激活Wnt/β-catenin信号通路，并促进SCF表达，抑制p21表达，调节细胞周期，从而促进衰老大鼠MSC增殖。左归丸水煎液可促进MSC体外衰老模型的增殖能力，其机制可能与p21和SCF表达有关。在急性心肌缺血情况下，左归丸对衰老大鼠的氧化应激损伤及急性心肌损伤有一定的保护作用，且对衰老大鼠MSC的自身动员有一定的促进作用,并能影响心肌组织细胞的新生。.本研究进一步从分子和蛋白水平证明了“干细胞具有先天之精属性，是先天之精在细胞层次的存在形式”理论假说的的科学性，丰富＂肾藏精＂现代理论新实质。初步证明“干细胞及其调控系统的衰老是衰老根本原因”这个新的理论假说，也为“精”的干细胞学说提供更充分的科学依据。