蛋鸡生殖道相关性淋巴组织发育规律的研究

It is of great importance to learn about the changes of reproductive tract mucosal immune status by studying the normal development of hens, especially during the immediate post-hatch and laying period, because the chicken reproductive tract associated lymphoid tissue（RTALT） is the first immune barrier of the genitourinary tract against the invasion of external pathogenic microorganisms. This study can serve as a theoretical basis of the reproductive tract disease prevention (especially salmonellosis) for laying hens, and ultimately achieve the goal of providing pollution-free eggs for people to consume. In this programme, the development process and characteristics of the RTALT histological structure will be examined using conventional staining methods. In addition, the continuous development process of immune cells will be tested by immunohistochemical methods and flow cytometry, followed by futher analysis of the variation and their relationship. And mRNA expression levels of cytokine and TLRs at different developmental stages of the RTALT will also be characterized by real-time fluorescence quantitative PCR. Finally,Salmonella -specific antibodies in serum and mucosal washing will be detected by Indirect ELISA at different development stages of reproductive tract after the injection of Salmonella attenuated vaccine. Thus, we could obtain valuable information of the immune function development process and the regularity of the RTALT on the molecular level.

鸡生殖道相关性淋巴组织作为泌尿生殖道抵御外界病原微生物入侵的第一道免疫屏障，研究其正常发育将了解蛋鸡生殖道粘膜免疫状态的变化情况，尤其是出壳初期和产蛋期间的免疫状态，从而为蛋鸡生殖道疾病（尤其是沙门氏菌病）的防治提供理论依据，并最终为人们能够食用上健康无污染的鸡蛋奠定基础。本项目拟采用常规染色方法观察生殖道相关性淋巴组织的组织结构发育过程和特征；免疫组织化学方法和流式细胞技术观察免疫细胞的发育过程，并分析其变化规律及相互关系；实时荧光定量PCR技术检测不同发育阶段生殖道相关性淋巴组织中细胞因子和Toll样受体mRNA的表达水平，并在不同生长发育阶段生殖道免疫沙门氏菌弱毒苗后，间接ELISA法检测血清和粘膜洗液中的沙门氏菌特异性抗体，从而从分子水平研究生殖道相关性淋巴组织的免疫功能发育过程及规律。

鸡生殖道相关性淋巴组织作为泌尿生殖道抵御外界病原微生物入侵的第一道免疫屏障，研究其正常发育将了解蛋鸡生殖道粘膜免疫状态的变化情况，尤其是出壳初期和产蛋期间的免疫状态，从而为蛋鸡生殖道疾病（尤其是沙门氏菌病）的防治提供理论依据，并最终为人们能够食用上健康无污染的鸡蛋奠定基础。本项目通过常规染色方法研究不同生长发育阶段蛋鸡生殖道相关性淋巴组织的组织结构发育过程和特征，结果表明蛋鸡卵巢35日龄之前还未形成完整的卵泡结构，此后随着日龄增长，特征性组织结构，如卵泡壁和淋巴小结逐渐出现和成熟，输卵管中淋巴样结构也随日龄增长逐渐成熟，尤其是在140日龄以后，淋巴组织更为明显，并逐渐达到成熟水平；通过免疫组织化学方法结合图象分析技术研究不同生长发育阶段免疫细胞在生殖道中发育情况，研究发现，7日龄时Bu-1+B淋巴细胞较早地出现在卵巢组织中，此后随着日龄增长各种免疫细胞在卵泡间质和卵泡壁中均有分布，并逐渐增多，120日龄后达到成熟水平，输卵管由于组织结构在90日龄后才快速发育，因此其中的免疫细胞在90日龄后逐渐增多，并在140日龄时达到成熟水平；利用实时荧光定量PCR技术研究不同生长发育阶段生殖道相关性淋巴组织中Th1、Th2两类细胞因子mRNA的表达水平，从而研究生殖道相关性淋巴组织的非特异性免疫功能发育过程及规律，结果表明，IL-4和IFN-γ的关系为相互制衡，IL-2和IL-10的表达也呈相互抑制。此外，在此研究中虽然总体表达水平在母鸡性成熟之后较性成熟之前有所降低，但在性成熟之后Th2型细胞因子的表达水平却超过了Th1型，表明在性成熟之后，卵巢中发生的免疫应答平衡更偏向于以体液免疫应答为主的Th2类免疫应答反应；利用间接ELISA法检测粘膜冲洗液中和血清中的沙门氏菌特异性IgG、IgM、IgA 抗体，从而研究了生殖道相关性淋巴组织的特异性免疫功能发育过程及规律，结果表明，通过不同日龄泄殖腔接种沙门氏菌，能够诱导输卵管和卵巢产生明显的局部免疫应答，并诱导机体产生明显的全身免疫应答。