鸡呼吸道相关性淋巴组织发育及其免疫功能发生的研究

呼吸道相关性淋巴组织（RALT）作为机体抵御外界病原微生物入侵的第一道免疫屏障，研究其正常发育将了解鸡在胚胎期以及出壳初期呼吸道粘膜的免疫状态，为鸡呼吸道疾病（尤其是禽流感）的防治即研制并使用有效的鼻腔免疫疫苗和适时进行免疫提供理论依据。我们拟从组织水平、细胞水平和分子水平对鸡RALT及其免疫功能的正常发育进行深入研究：常规染色方法观察RALT组织结构的发育过程和特征；免疫组织化学方法观察T、B淋巴细胞及其亚群在RALT中的出现、迁移、组织定位和分布等发育过程，并分析淋巴细胞各亚群的变化规律及相互关系；实时荧光定量PCR技术检测不同发育阶段RALT中细胞因子IL-2、IFNγmRNA的表达水平，并在不同生长发育阶段滴鼻免疫无毒害的T依赖抗原BSA后，间接ELISA法检测BSA特异性抗体，从而从分子水平研究RALT的功能发生过程及规律。

鉴于RALT的特殊位置及其不断地接受外界抗原刺激，我们通过研究鸡RALT的发育及其功能发生，了解到不同时期鸡呼吸道粘膜免疫状态的变化情况，尤其是出壳初期的免疫机制，从而为鸡呼吸道疾病（尤其是禽流感）的防治即研制并使用有效的鼻腔免疫疫苗和适时进行免疫提供了理论依据。.（1）组织水平：呼吸道各段粘膜中的RALT基本都在4日龄和7日龄时出现，从而形成了呼吸道免疫的组织结构基础。随着日龄的增长，RALT特征结构不断发育，并基本在35日龄时达到成熟水平。.（2）细胞水平：各种免疫细胞基本都是在胚胎末期及出壳后1日龄时出现。4日龄和7日龄时除了气管外，其他呼吸道各段都形成了含有较多T、B淋巴细胞、巨噬细胞以及MHC-Ⅱ+细胞的RALT，从而具备了参与呼吸道免疫的细胞基础。随着日龄增长各种免疫细胞的数量基本都呈上升趋势，并且在14日龄时基本达到成熟水平。值得注意的是，35日龄之前淋巴细胞以CD3+T淋巴细胞为主，而35日龄之后以Bu-1+ B淋巴细胞为主，并且CD3+T淋巴细胞以辅助性CD4+亚群细胞为主，而Bu-1+ B淋巴细胞以IgA为主，由此可以初步判断35日龄之前呼吸道免疫以细胞免疫为主，而35日龄之后以粘膜免疫和体液免疫为主。.（3）分子水平：胚胎时期以及出壳后1日龄和4日龄时，RALT中细胞因子IL-2和IFN-γ的表达水平极低，但此后随着日龄增长，其表达水平逐渐增加，并且在14日龄时迅速增加至较高水平，并在21日龄时基本达到峰值，而且各时期IFN-γ的表达水平都远高于IL-2，这说明，随着生长发育RALT的细胞免疫功能逐渐增强，并且在出壳初期的第二周内增加尤为显著，并且在21日龄时基本达到成熟水平，另外IFN-γ将在呼吸道淋巴组织执行细胞免疫功能的过程中发挥主要作用；另外通过BSA刺激RALT产生的特异性抗体也呈现明显的年龄相关性变化，1日龄和4日龄免疫组无抗体产生，即此阶段RALT对外界抗原没有产生体液免疫应答，7和10日龄免疫组出现初步应答，但抗体水平较低，而14日龄免疫组对BSA形成强烈免疫反应，并产生较高的抗体水平，而且IgA抗体水平最高，说明RALT的体液免疫功能在14日龄时基本成熟。