特异溶瘤腺病毒对前列腺癌免疫治疗的实验研究与机制

我国前列腺癌发病率逐年上升，目前，对于晚期、转移及激素非依赖型患者仍缺乏有效手段。DC是启动、调控和维持机体免疫应答的中心环节，近年来，以DC作为靶标的肿瘤免疫治疗取得了令人鼓舞的结果。DC表面高表达CD40分子，肿瘤抗原与CD40L融合表达，能通过CD40L的靶向作用，将肿瘤抗原带到DC表面，进而有效激活机体特异性抗肿瘤免疫反应。而GM-CSF对于促进DC的成熟分化具有重要作用。本研究将这种靶向免疫激活作用与溶瘤腺病毒相结合，制备携带GM-CSF和PSA-IZ-CD40L融合蛋白基因、且能在前列腺癌细胞中特异性复制的免疫溶瘤双功能腺病毒。研究该免疫溶瘤双功能腺病毒的体外溶瘤及免疫激活作用；建立人前列腺癌的裸鼠模型，评价体内溶瘤作用；建立鼠前列腺癌动物模型，制备携带鼠源性基因的免疫溶瘤双功能腺病毒，评价体内抗肿瘤效应，探讨其可能机制。从而为前列腺癌的治疗提供一种更加有效的治疗手段。

本研究将免疫治疗的最新成果与溶瘤腺病毒有效结合，成功构建并制备了携带GM-CSF和PSA-IZ-CD40L融合蛋白基因（PL）、且能在前列腺癌细胞中特异性复制的免疫溶瘤双功能腺病毒Ad-PL-GM-PPT-E1A，然后在体内外对其功能进行了评价，取得了以下结果：（1）体外溶瘤功能进行评价：Ad-PL-GM-PPT-E1A感染前列腺癌细胞后，可出现明显的细胞完全病变；进一步的TCID50检测表明，该病毒能够在前列腺癌细胞中有效并特异地复制；结晶紫和MTT法检测的结果表明，Ad-PL-GM-PPT-E1A能够有效并特异杀伤前列腺癌细胞。（2）体外免疫激活效应：Ad-PL-GM-PPT-E1A感染前列腺癌细胞后获得的上清或裂解液，不仅能够激活人外周血单个核细胞的增殖和特异性杀伤效应，还能够促进人外周血单个核细胞来源的DC细胞的成熟及细胞因子的分泌。（3）成功建立前列腺癌细胞PC3的移植瘤模型，评价体内溶瘤作用：TCID50检测表明其能够在移植瘤中有效复制，同时能够有效抑制移植瘤的生长及转移。（4）成功构建了携带鼠源性基因的重组质粒pUDK-PmL-IR-GM，评价体内免疫激活效应： pUDK-PmL-IR-GM能够有效促进小鼠脾脏T淋巴细胞的增殖和特异性杀伤效应。综上所述，我们成功研制了前列腺癌特异性免疫溶瘤双功能腺病毒Ad-PL-GM-PPT-E1A，其能够在体内外有效发挥特异性溶瘤和免疫效应，为进一步临床前研究提供了实验基础和依据，希望最终为前列腺癌的治疗提供一种更加有效的治疗手段。本项目共发表学术论文六篇，待发表两篇；申请国家发明专利两项，其中授权一项（ZL2008101826884），公开一项（201010154620.2）；协助培养硕士研究生两名，博士研究生两名。