血浆miRNA作为胃癌早期生物标志物的分子流行病学研究

自从2008年中美学者发现血浆miRNA以来，血浆miRNA作为疾病诊断、治疗和预后的潜在生物标志物备受关注。血浆miRNA具有含量丰富、性质稳定、易于检测等特征，有望成为胃癌等恶性肿瘤的早期发现生物标志物。课题组前期依托Solexa分析系统构建了血浆miRNA表达谱，初步筛选了胃癌特异的血浆miRNA谱，本课题将在此基础上，进行独立验证和交叉验证进一步筛选和优化胃癌血浆miRNA生物标志物；通过已经收集的胃癌发病早期多阶段病变样本，评价血浆miRNA作为胃癌早期生物标志物的价值；应用分子生物学手段初步探讨相关miRNA发生和作用机制。本课题的顺利实施有助于建立胃癌血浆miRNA表达谱数据库，获得可能用于胃癌早期筛查的血浆miRNA早期生物标志物，初步阐明相关miRNA在胃癌发生中的生物学机制，为确定简单易行微创价廉的胃癌早期筛查生物标志物提供理论和技术基础。

本课题采用多阶段分子流行病学研究设计，首先通过TLDA表达芯片在40例病例和40例健康对照中构建了早期非贲门胃腺癌的血浆miRNA表达谱，筛选出稳定且差异表达的miRNA。其次通过方法学验证（qRT-PCR）和大样本（包括早期胃癌48例，胃部病变54例，健康对照48例，累计150例）的独立验证，鉴定出5个具有潜在诊断价值的miRNA（miR-16、miR-25、miR-92a、miR-451、miR-486-5p）。随后通过ROC曲线下面积（AUC）评价这些miRNA在胃癌早期诊断中的价值，5个miRNA联合后在初筛和验证阶段的AUC分别为0.989和0.812。此外，我们在18例晚期非贲门胃癌和36例贲门癌血浆中也发现这些miRNA高表达。最后，通过检测不同细胞浓度，不同时间段胃癌细胞系(BGC823和MGC803)培养液中miRNA的表达发现，miR-16, miR-25, miR-92a胃癌细胞培养后的表达量显著增加，提示这三种miRNA可能为分泌型，而miR-451和miR-486-5p并未发现这种现象，初步探讨了血浆miRNA的发生机制。此外，本课题组开展了基因组遗传变异与与胃癌易感性的研究，发现多个易感性相关遗传标志物。本课题为胃癌的风险预测和早期筛查提供了理论基础和技术支持。本项目的研究成果已发表基金标注研究论文12篇（SCI收录11篇），以第一作者或通讯作者发表SCI论文9篇（含6篇影响因子大于5），获得中华医学科技奖三等奖一项；参加国内外学术交流10次，大会特邀报告2次；3人赴美国进修，项目负责人入选江苏省“333”工程中青年学术带头人；培养博士研究生1名，硕士研究生2名。