基于PD-L1二聚体形成探索加味阳和汤改善三阴性乳腺癌免疫微环境的机制

The treatment of triple negative breast cancer (TNBC) is limited and has become a major disease that affects women's health. PD-L1 is a key molecule in the formation of TNBC tumor immune microenvironment. We have achieved a good curative effect by using Jiawei Yanghe Decoction (JWYHD, Yanghe Decoction with Rhodiola) as adjuvant therapy for TNBC. Our previous study have found that JWYHD can significantly inhibit the growth of TNBC xenografts, increase the thymus and spleen index of transplanted tumor mice, upregulate the proportion of CD8+ cells in the spleen, and improve the immune microenvironment of TNBC, and its mechanism may be related to the promotion of PD-L1 Dimer formation (dimerized PD-L1 function is inhibited). Therefore, we propose the following work hypothesis: JWYHT may induce the formation of PD-L1 dimer to improve the TNBC immune microenvironment and inhibit the growth of TNBC. This study we intend to use gene mutation and overexpression techniques to construct TNBC that inhibits the formation of PD-L1 dimer, and to explore the role of induced PD-L1 dimer formation in JWYHD to improve the immune environment of TNBC and inhibit TNBC growth. This provides the experimental basis for the clinical treatment of TNBC by YHD, and provides ideas and methods for discovering new targets for the treatment of TNBC by TCM.

三阴性乳腺癌（TNBC）治疗手段有限，已成为危害女性健康的重大疾病。PD-L1是TNBC肿瘤免疫微环境形成的关键分子。本课题组采用加味阳和汤（阳和汤加红景天）辅助治疗TNBC取得了良好的临床疗效。我们进一步研究发现：加味阳和汤能显著抑制TNBC移植瘤的生长，升高移植瘤小鼠胸腺、脾脏指数，上调脾脏CD8+细胞比例，改善TNBC免疫微环境，其机制可能与促进PD-L1二聚体形成有关（二聚体化的PD-L1功能被抑制）。因此，我们提出以下工作假说：加味阳和汤可能通过诱导PD-L1二聚体形成，改善TNBC免疫微环境，抑制TNBC的生长。本研究拟采用基因突变和过表达技术构建抑制PD-L1二聚体形成的TNBC，探索诱导PD-L1二聚体形成在加味阳和汤改善TNBC免疫环境，抑制TNBC生长中的作用。为临床以阳和汤为基础辅助治疗TNBC提供实验依据，为发掘中医药治疗TNBC的新靶点提供思路和方法。

加味阳和汤(JWYHD)是临床上广泛应用的治疗自身免疫性疾病的中药方剂。许多研究表明，JWYHD在细胞和动物模型中具有抗肿瘤活性。然而，JWYHD的抗乳腺癌作用和潜在的作用机制尚不清楚。本研究旨在通过体内，体外模型和计算机分析，确定加味阳和汤抗乳腺癌的作用，并探讨其作用的潜在机制。建立原位异种移植乳腺癌小鼠模型观察JWYHD的抗肿瘤作用和PD-L1二聚体的诱导作用。通过建立PD-L1突变型细胞系及小鼠模型，以探讨JWYHD抗乳腺癌的治疗机制。JWYHD剂量依赖性地显著抑制了原位异种移植乳腺癌小鼠模型中地肿瘤生长。TUNEL然染色和IHC结果显示，JWYHD 能显著诱导细胞凋亡。流式细胞术和IHC结果表明，JWYHD能降低 M2巨噬细胞和 Treg 的表达，同时增加 M1巨噬细胞的表达。ELISA和免疫印迹试验(Western blot)结果显示，JWYHD组肿瘤组织中 IL-1β、 IL-6、PD-L1均下降。通过突变型PD-L1突变型细胞系及小鼠模型证实了JWYHD能诱导PD-L1二聚体的形成从而发挥抑制肿瘤的作用。加味阳和汤具有防治TNBC的作用，其作用机制可能与诱导PD-L1二聚体形成，改善抗肿瘤免疫微环境有关。我们的研究结果为 JWYHD在乳腺癌治疗中的临床应用提供了强有力的药理学证据。