基于LPA/EZH2/AP-1信号通路研究阳和汤治疗三阴性乳腺癌的生物学机制

Yanghe Decoction has significant clinical treatment effects on breast cancer according to records of ancient books. Recently many researchers have studied on triple negative breast cancer (TNBC) treated with Yanghe Decoction. However, its mechanism is unclear. Latest studies revealed that LPA/EZH2/AP-1 signal pathway plays an important role in the development and progression of TNBC. Our previous studies have found that Yanghe Decoction have effects on NF-κB, IL-6, IL-8 and CXCL1, which are crucial factors in LPA/EZH2/AP-1 signal pathway. Accordingly, we put forward the hypothesis that Yanghe Decoction can intervene LPA/EZH2/AP-1 signal pathway to exert the anti-tumor efficiency in TNBC. We plan to establish various cell models and transplanted tumor in nude mice models, and test the key protein and mRNA expressions and biological effect indexes by using modern techniques, such as MTT, ChIP, Western blot, qRT-PCR, Flow cytometry, to explore and validate mechanisms of the effects of Yanghe Decoction on TNBC. This study will be of great significance to reveal the biological mechanisms and laws of TNBC in the treatment of Yanghe Decoction, and provide a new thought for the anti-tumor mechanisms of Yanghe Decoction.

古籍记载，阳和汤治疗乳腺癌临床疗效较好。近年来，阳和汤对三阴性乳腺癌(TNBC)的研究也屡见报道，然其作用机制却不甚明了。国外最新研究发现LPA/EZH2/AP-1信号通路是TNBC发生发展的重要机制，课题组前期研究发现，阳和汤对该通路关键指标NF-κB、IL-6、IL-8、CXCL1有显著影响，据此提出假说：阳和汤可能通过调控LPA/EZH2/AP-1信号通路从而发挥治疗TNBC的作用。本课题拟分别建立TNBC细胞模型和裸鼠移植瘤模型，采用MTT、ChIP、Western blot、qRT-PCR、流式细胞术等，检测该信号通路蛋白和mRNA表达以及生物学效应指标，探索并验证阳和汤通过调控LPA/EZH2/AP-1信号通路治疗TNBC的生物学机制。本研究将对揭示阳和汤治疗TNBC的生物学机制和规律具有重要意义，为阳和汤抗肿瘤机制研究提供新思路。

课题组在前期对阳和汤治疗乳腺癌的基础研究与临床疗效验证的基础上，结合国内其他学者的研究报道，发现阳和汤对三阴性乳腺癌(TNBC)的临床疗效确切，但对其机制研究却不够深入。为了系统探索阳和汤对TNBC治疗的作用机制，我们依据国外最新关于LPA/EZH2/AP-1信号通路是TNBC发生发展的重要机制这一研究发现，结合课题组前期关于阳和汤对调控该通路关键指标NF-κB、IL-6、IL-8、CXCL1有显著作用的研究基础，我们分别建立了TNBC细胞模型和TNBC移植瘤裸鼠模型，在正常乳腺上皮细胞、两种不同的TNBC细胞体外培养过程中，运用分子阻断技术，以不同剂量阳和汤（或含药血清）分别干预细胞，以及对裸鼠移植瘤模型进行不同剂量的阳和汤干预，在不同的干预的时间点，分别采用ChIP检测EZH2与RelA、RelB的结合情况；MTT检测细胞增殖情况；流式细胞术检测细胞周期；DAPI染色观察细胞核形态Westernblot以及qRT-PCR检测LPAR、EZH2、NF-κB、IL-6、IL-8、CXCL1、IL-6ST、CXCR1、CXCR2、STAT3、AP-1蛋白以及mRNA表达情况。对TNBC裸鼠移植瘤模型定期测量各组裸鼠肿瘤长径及短径；实验结束时称量各组裸鼠肿瘤质量；计算各组裸鼠肿瘤生长抑制率Westernblot和qRT-PCR检测LPAR、EZH2、NF-κB、IL-6、IL-8、CXCL1、IL-6ST、CXCR1、CXCR2、STAT3、AP-1蛋白和mRNA表达；ELISA测裸鼠移植瘤模型血清LPA含量。研究结果表明，阳和汤对LPA/EZH2/AP-1信号通路相关上述各蛋白和基因具有明显的调控作用，对TNBC具有显著的治疗作用，通过该研究明确了阳和汤调控LPA/EZH2/AP-1信号通路干预TNBC的作用靶点和规律，明确了阳和汤治疗TNBC的生物学机制；进一步明确了阳和汤能够通过调控LPA/EZH2/AP-1信号通路治疗TNBC，为临床应用阳和汤治疗TNBC提供了理论与实验依据。本研究对揭示阳和汤治疗TNBC的生物学机制和作用规律具有重要意义，为阳和汤抗肿瘤的作用机制研究提供了新思路。