以镶边空泡为病理改变的肌病构成及致病基因筛查/定位研究

Rimmed vacuoles (RV) are a characteristic pathological feature in inclusion body myositis or inclusion body myopathy,but may also occur in other neuromuscular disorders. These neuromuscular disorders have differrent clinical phenotypes,causative gene and treatment methods.Because of the limited myopathological diagnostic conditions,rimmed vacuoles was lack of systematic study in China. This study based on the genetic resources of Chinese myopathy patients and families. We will screen the patients with the pathological feature of rimmed vacuoles, and perform mutation screenings of the known causative gene by the second generation of gene chip technology. All mutations will be further confirmed by Sanger sequencing. We plan to find the novel causative gene by using microsatellite markers and linkage analysis or exome sequencing .The objectives of our study are: 1) identify the classification of myopathies with the pathological feature of rimmed vacuoles in China.2) identify the novel mutations of candidate gene of myopathies with the pathological feature of rimmed vacuoles in Chinese patients.3) identify causative gene of Chinese myopathies family with uncertained classification. The results of this study will further expand the clinical and genetic spectrum of myopathies with the pathological feature of rimmed vacuoles in China, expand the differential diagnosis of the myopathies with this myopathological presentation and provide useful clues as to the pathogenesis of protein degradations pathway, the possible mechanism of rimmed vacuoles in neuromuscular diseases.

镶边空泡是一种少见的非特异性肌肉病理表现，并非包涵体肌病/炎的特征性病理改变，有多种肌病是以镶边空泡为主要或合并其他组织病理学表现，但临床表现、致病基因及治疗存在显著差异。受临床资源及诊断条件限制，国内针对这一单一肌肉病理改变尚缺乏系统研究。本课题旨在立足于中国肌病资源，采集肌病患者及家系肌肉及DNA样本，通过肌肉病理检查筛选出伴镶边空泡病理改变的患者，利用二代基因芯片技术，对患者及家系DNA样本进行可疑致病基因检测，新发突变行一代Sanger验证；通过全外显子测序技术，对不明确分型患者及家系进行基因定位研究。以期通过本课题了解中国人群中伴镶边空泡病理改变的肌病种类构成现状，进一步扩展相关肌病鉴别诊断病种，提高此类肌病诊断率；发现伴镶边空泡病理改变的肌病已知致病基因新突变位点和突变型，完成不明确分型家系致病基因定位，为进一步探讨镶边空泡产生的可能蛋白降解途径机制提供分子生物学依据。

背景：镶边空泡（RVs）是一种少见的非特异性肌肉病理表现，有多种肌病是以RVs为主要或合并其他组织病理学表现，但临床表现、致病基因及治疗存在显著差异。受临床资源及诊断条件限制，国内针对这一单一肌肉病理改变尚缺乏系统研究。.主要研究内容：利用二代基因芯片进行已知肌病致病基因检测，全外显子测序（WES）技术对不明确分型患者及家系进行基因定位研究。.重要结果及关键数据：本研究纳入140例患者，包括13种分型：39例DMRV或GNE、35例sIBM、15例OPDM、2例OPMD、1例IBM3、6例MFM、2例RBM、1例XMPMA、2例LGMD1E、2例LGMD 2I、4例BMD、1例管聚集性肌病、1例DM1。未知分型散发患者23例，家系2个。发现 9个 GNE 基因新发突变：c.556T>C、c.733A>G、c.778A>C、c.1559A>G、c.1543-1544delGA、c.1711_1712del、c.1205dupT、c.1634-1G>C splicing、c.1619-2A>C splicing。2个FHL1 基因新发突变： c.787G>A、c.814T>C。1个LDB3 基因新发突变c.480G>C。1个DNAJB6 基因新发突变c.299T>C。1个FKRP基因新发突变c.242_243insGGC。2个CACNA1S 基因新发突变：c.5105G>A、c.2960A>G。发现2个FLNC基因新生突变：c.5071G>A、c.7012G>A，1个DNAJB6 基因新生突变：c.279C>G。2个未知分型伴RVs肌病家系，家系1呈常显遗传，WES示ANKRD32 和C19orf26为可能致病基因；家系2呈常显或常隐性遗传，WES示THAP7 和PABPC1为可能致病基因。.科学意义：本项目发现目前我国伴RVs病理表现肌病分类有13种。发现已知基因新发突变点16个，新生突变3个。发现1例伴RVs病理表现的症状性女性BMD携带者。首次发现伴RVs病理改变RBM中国家系。首次发现中国XMPMA患者，且伴RVs病理改变。首次在LDB3 基因突变所致MFM、LGMD1E、管聚集肌病患者肌肉组织中发现RVs病理改变。发现2个伴RVs病理表现家系，家系1致病基因可能为ANKRD32和C19orf26；家系2致病基因可能为THAP7和PABPC1。