一种新发现的小RNA病毒-HPeV3与儿科一些重症疾病关系的探索

Central nervous system (CNS) viral infections and sepsis are important causes for death of infants and young children worldwide. Human parechoviruses (HPeV) were re-classified into Parechovirus genus of Picornaviridae. Until 2004 only HPeV type 1 and 2 were known to circulate in humans. A new type of HPeV (HPeV 3) was reported in foreign literature that was associated with CNS infections and sepsis in newborns, infants and young children. Several retrospective studies indicated that HPeV3 was the predominant agent of HPeV-related CNS infections, such as meningitis and encephalitis, and it was specifically related to sepsis in newborns and infants. CNS infections and sepsis are important for infants and young children in China, however, few etiological data is available and no report about HPeV3 has been seen currently. Take advantage of work experiences on etiological study on newly discovered viruses in children supported by the previous grants funded by National Nature Science Foundation of China, this proposed project will focus on investigation of the etiological role of HPeV3 to the serious clinical syndromes of CNS viral infections and sepsis in newborns and infants, by using molecular and biological techniques, classical virological methods, hybridoma technique to establish the techniques of antigen and serological diagnosis for HPeV 3. Different kinds of clinical samples will be collected from newborns and young infants with CNS infections and sepsis. HPeV 3 strains will be isolated from clinical samples and sequence of the genome will be analyzed, Anti-HPeV 3 or VP1 of HPeV 3 monoclonal antibodies (McAbs) will be generated for detection of HPeV3 from clinical samples for the diagnosis. Serological assays will be established using a recombinant VP1 protein or specific immunogenic peptides with antigenic epitopes on VP1 to determine HPeV type-specific infections.

中枢神经系统(CNS)病毒感染和脓毒症是全球儿童感染和死亡的重要原因。国外文献报道人副肠孤病毒3型（HPeV3）是与新生儿和婴幼儿CNS感染及脓毒症相关的新发现的小RNA病毒。国内尚无针对该病毒在这方面的研究。本项目将利用国家自然基金前一资助项目中对新发病毒的病原学研究的工作经验，利用经典病毒学方法、分子生物学方法和杂交瘤技术，建立特异性抗原诊断和血清学诊断方法，通过对感染患儿的多种临床标本的病原分析以及临床相关研究，获得我国地方株HPeV3毒株，分析地方株的基因组信息、基因变异、重组特征以及遗传进化趋势以及不同年龄组人群针对HPeV3的特异性血清抗体水平以及HPeV3感染的临床特征，分别从病毒学、分子生物学和血清学等方面了解HPeV3在我国新生儿和婴幼儿CNS感染和脓毒症中的病毒特征、感染特征、流行规律，为HPeV3在我国新生儿和婴幼儿CNS感染和脓毒症中的病原学作用提供循证医学的依据。

本研究对儿科疑似CNS感染患儿中HPeV3的感染状况及该病毒的分子生物学特征进行了研究。对2012-2014年收集的儿科疑似CNS感染患儿脑脊液（CSF）和相应的血清及粪便标本进行了HPeV的筛查。通过位于HPeV的5'UTR保守区域的通用引物进行筛查，并通过位于HPeV的VP3/VP1交界区的特异性引物进行分型鉴定，扩增产物经测序比对后确定型别。2012年收集的577份CSF标本中检出18份HPeV阳性标本，阳性检出率为3.1%。阳性患儿无性别差异，年龄范围为15天至14岁，分布于各年龄组，其中3个月以下患儿最多，占38.9%（7/18）；其次是3个月至1岁年龄组，占27.8%（5/18）；另有3例大龄HPeV阳性患儿（大于9岁）。对分型成功的10份HPeV的序列分析显示，在CSF中只检出1型（3份）和3型（7份），其中3型为主要型别。CSF筛查阳性患儿同期的其他类型标本中，8份血清标本中检出2份阳性（均为HPeV3），其中1份与CSF标本检出及分型结果一致，而与另1份血清对应的CSF标本筛查为阳性，但是未能分出型别；2份粪便标本中检出1份阳性（HPeV1），但对应的CSF标本未能分出型别。HPeV阳性患儿临床诊断主要是脓毒症（38.9%，7/18）和CNS感染（22.2%，4/18）；8例HPeV3阳性患儿中有6例诊断为脓毒症。HPeV3感染多集中于八月份，而HPeV1则集中于一月份。2013年收集到的544份CSF标本中检出5份HPeV阳性标本，阳性检出率为0.9%。阳性患儿无性别差异，年龄范围为12天至9岁，其中3个月~1岁患儿最多（2/5），另有1例大龄HPeV阳性患儿（大于9岁）。对分型成功的4份HPeV的序列分析显示，在CSF中只检出1型（2份）和3型（2份）。CSF阳性患儿同期的其他类型标本中，仅在1份鼻咽吸出物标本中检出HPeV1，与对应的CSF标本分型结果一致。4例HPeV阳性患儿临床诊断为CNS感染 （4/5）；1例为脓毒症（HPeV1）。2份HPeV1集中在7月份检出，2份HPeV3分别在3月份和7月份检出。2014年收集的668份CSF标本中检出2例HPeV阳性标本，阳性检出率为0.3%，分型均未成功。将上述部分HPeV筛查阳性标本接种至Vero E6细胞进行病毒分离。成功分离得到一株HPeV1毒株BJ-37359且可连续传代培养，未能成功