经方下瘀血汤调控ACE2介导的RAS自稳抑制肝纤维化发展的实验研究

我国肝硬化的发病率高，由于肝硬化的难治性及其向肝癌转变的高发生率，因而如何延缓、阻断或逆转肝纤维化成为当前研究的热点。目前仍缺乏突破性的药物治疗肝纤维化。申请人前期研究显示RAS之ACE-ANGⅡ-AT1R通路活化与肝纤维化关系密切。新近有报道RAS内还存在ACE2-Ang(1-7)-MAS通路，与经典的ACE-ANGⅡ-AT1R通路相互制约；以ACE2为干预靶点，恢复或重建RAS的自稳平衡成为肝纤维化防治的新亮点。文献报道及申请人临床体会均显示经方下瘀血汤可抑制肝纤维化的发展，预实验发现其机制与该方能增强ACE2的表达有关，故我们推测调控ACE2介导的RAS自稳可能是下瘀血汤抑制肝纤维化发展的深层机制。本课题基于此，以CCL4诱导的大鼠肝纤维化模型、原代培养的HSC及表型活化的HSC-T6细胞株为研究平台，用ACE2激动剂、阻断剂及腺病毒转染等方法干预，对比分析经方下瘀血汤的疗效机制。

第一部分 疏肝、祛湿、化瘀、养阴四法对肝纤维化大鼠肝脏超微结构的影响. 33只Wistar大鼠随机分为6组，即正常对照组、柴胡疏肝散组、茵陈蒿汤组、下瘀血汤组、一贯煎组和模型组。实验结束后通过常规透射电镜观察各组大鼠肝脏超微结构的改变以比较其作用差异。结果显示：疏肝、祛湿、化瘀、养阴四法对应的经典方剂均能减轻CCL4导致的肝细胞损伤，阻断胶原纤维的生成，而达到抗肝纤维化的目的。下瘀血汤抗肝纤维化的作用优于茵陈蒿汤，茵陈蒿汤优于一贯煎与柴胡疏肝散，而一贯煎与柴胡疏肝散作用差异不明显。.第二部分 经方下瘀血汤调控ACE2介导的RAS自稳抑制肝纤维化进展的实验研究. 27只Wistar大鼠随机分为5组，即正常对照组、去除病因组、下瘀血汤组、科索亚组和模型组。除正常对照组外，各实验组大鼠背部皮下注射2.5mL/kg 40%CCL4橄榄油混悬液造模，以下瘀血汤及科索亚干预肝纤维化进展。结果显示经方下瘀血汤可能是通过增加ACE2的表达，抑制ACE、AngⅡ和AT1R的表达, 从而使RAS中促进肝纤维化进展的经典通路ACE-AngⅡ-AT1R占优势转变为抑制纤维化的ACE2-Ang（1-7）-Mas受体轴占优势，从而抑制肝纤维化进展。.第三部分 茵陈蒿汤调控ACE2介导的RAS自稳抑制胆汁淤积性大鼠肝纤维化发展的实验研究 . 将33只SPF级雄性大鼠随机分为以下5组:假手术组；BDL 7天模型组；BDL+茵陈蒿汤组；BDL+氯沙坦组；实验周期为16天。结果显示茵陈蒿汤的抗肝纤维化作用可能与上调ACE2的表达，下调AngII和TGFβ1的蛋白表达，恢复与重建RAS自稳与平衡有关。.第四部分 系统分析我院354例肝硬化患者流行病学情况及发病的时间规律性研究. 回顾性分析2009年1月至2014年1月间的354例肝硬化患者的临床资料，并通过圆形分布法分析其发病的时间规律性。 结果显示肝硬化存在3月份发病率上升的时间规律性，男性组、＜60岁患者的时间规律性最为显著。乙肝肝硬化是湖北地区肝硬化的主要病因，防治病毒性肝炎是预防肝硬化的重要手段。积极防治肝硬化并发症上消化道出血是延长患者生命最重要的环节。.第五部分 成功申报肝硬化最常见并发症腹水相关的实用新型专利《可精确定位及防止感染的胸腹腔穿刺装置》