泽泻汤通过ROS/mTOR通路抑制自噬干预NASH肝纤维化的机制研究

Oxidative stress induced autophagy is one of the main pathogenesis of NASH hepatic fibrosis. Preliminary clinical study found that Zexie decoction can improve nonalcoholic fatty liver in patients with liver fibrosis, further study found that Zexie Decoction improve hepatic fibrosis, hepatic fibrosis in NASH mice, at the same time, in the electron microscope of Zexie Decoction intervention group significantly reduced the number of autophagosomes, down regulate the expression of mouse liver alpha -SMA and LC3- II. Expression of p-P70S6K, and Zexie decoction can significantly reduce the oxidative stress of the body, so we speculate that Zexie decoction may be through the ROS/mTOR pathway and inhibition of autophagy can play with anti hepatic fibrosis. The research group will build a classic NASH in vitro and in vivo hepatic fibrosis model, to observe the antioxidation effect of Zexie decoction, combined with the changes of autophagy pathway were observed by electron microscopy and fluorescence microscopy with MDC staining method, and observe the expression of ROS/mTOR and autophagy signaling pathway, using molecular biology method to explain the molecular mechanism of Zexie Decoction intervention of NASH hepatic fibrosis combined treatment of liver fibrosis, to find a new candidate target and experimental basis for the treatment of NASH hepatic fibrosis with integrated traditional Chinese and Western Medicine.

氧化应激诱导的自噬是NASH肝纤维化主要发病机制之一。本项目组前期临床研究发现，具有健脾泄浊，化湿利水功效的泽泻汤可以改善非酒精性脂肪肝患者的肝纤维化指标，进一步实验发现，泽泻汤改善NASH肝纤维化模型小鼠的肝纤维化病变，同时，在电镜下可见泽泻汤干预组自噬小体数明显减少，小鼠肝脏α-SMA及LC3-Ⅱ表达下调，p-P70S6K表达上调，而泽泻汤可以显著降低机体的氧化应激性，据此我们推测泽泻汤可能通过ROS/mTOR通路抑制自噬从而发挥抗肝纤维作用。本课题组拟构建体内外NASH肝纤维化模型，观察泽泻汤的抗氧化作用，通过电镜及MDC染色法结合荧光显微技术观察自噬通路的变化，并观察ROS/mTOR及自噬通路信号分子的表达变化，运用分子生物学方法阐释泽泻汤干预NASH肝纤维化的分子机制，为中西医结合治疗NASH肝纤维化发现新的候选靶点和实验依据。

积极干预非酒精性脂肪性肝纤维化是阻止其进展的有效措施，其具体发病机制尚未完全阐明，目前也无有效治疗措施，课题组发现非酒精性脂肪性肝炎主要是由于脾虚不运，痰浊内阻所致，临床研究发现具有健脾泄浊，化湿利水功效的泽泻汤具有显著的改善非酒精性脂肪肝患者肝功能、降低血脂、改善肝纤维化指标及B超结果的作用，本课题在此基础上进行了较深入的机制研究。通过液相质谱联用分析发现泽泻三萜类成分AA、AB、23B可能是泽泻汤的药效物质基础，并使用液相色谱准确测定了泽泻汤中AA、AB、23B的含量；并进一步通过体内体外实验进行深入研究，首次发现了NASH动物模型磷酸鞘氨醇相关的代谢物异常，其中Sphingosine，Sphingosine 1-phosphate，Sphinganine 1-phosphate 含量明显上升，这对NASH患者治疗、诊断及随访具有一定的临床应用价值。课题组进一步通过体内外实验证实泽泻汤通过ROS/mTOR通路抗氧化抑制自噬影响干预NASH肝纤维化，同时，课题组还发现泽泻中分离得到的有效成分AA通过激活AMPK/mTOR通路促进了自噬干预NASH肝纤维化，这也为泽泻汤的进一步临床深入开展和应用打下良好的临床和实验基础。上述研究结果运用分子生物学方法科学阐释泽泻汤干预NASH肝纤维化的可能作用机制，为中西医结合治疗NASH肝纤维化发现新的候选靶点和实验依据。泽泻汤在我院消化内科用于干预治疗NAFLD、NASH患者已经近十年，目前该项目相关成果已在本院推广应用并取得了显著的社会和经济效益。课题组在近年来在NAFLD、NASH肝纤维领域已承担包括国家自然科学基金在内的相关课题5项，共计发表直接相关文章8篇，其中SCI2篇 ,6篇核心期刊论著及综述；完成2名科研型硕士研究生的培养，申请国家发明专利一项，2020年度获第十一届上海中医药科技奖三等奖。