基于TLR4信号通路介导急性前葡萄膜炎的红芪多糖干预机制及作用位点的研究

Acute anterior uveitis is a serious intraocular inflammatory disease. Glucocorticoids and immunosuppressants are currently the most commonly used drugs of uveitis therapy. However these two types of drugs both have some negative aspects such as severe side effects or withdrawal symptoms, which might result in limited application. Our previous works have demonstrated that blocking the TLR4 signal pathway could successfully suppress the inflammation. We assume that HPS could target the TLR4/MD2 complex and block the subsequent signal transduction in order to inhibit the uveitis. We propose to investigate the interventional mechanism of Hedysarum polybotrys saccharide (HPS) on the TLR4 signal pathway mediated acute anterior uveitis by gene defect animal experiments, cell culture and PBMC isolation; to seek the acceptor sites of HPS by cell transfection and co-immunoprecipitation; to explore the molecular mechanism underlying the effect of HPS on AAU by using genechip.We hope to provide a new direction for the treament of acute anterior uveitis and to explore the potential values inside TCM.

急性前葡萄膜炎是严重的眼部炎性疾病，糖皮质激素和免疫抑制剂作为目前首选治疗药物，因副作用大、停药易复发等特点使临床应用受限。基于国内外研究进展及我们已有的工作基础证实了TLR4 上游的阻断使炎症抑制，针对治疗上的盲点我们提出假设：红芪多糖可以通过对虹膜巨噬细胞膜TLR4/MD-2复合体靶向抑制，阻断后续信号通路的传导，从而改善葡萄膜的免疫状态，达到抗炎的作用。本课题拟采用动物实验、体外细胞系培养、患者外周血单个核细胞培养，通过观察红芪多糖对巨噬细胞吞噬功能及TLR4传导通路相关分子的影响，了解其免疫调节功能；通过共转染细胞系的建立及人类PBMC的处理，探寻红芪多糖干预LPS-TLR4信号通路的具体靶点；通过基因芯片技术研究红芪多糖在基因转录水平对疾病的干预作用。以期解释红芪多糖在急性前葡萄膜炎中的具体抗炎机制，为疾病的靶向治疗提供新的方法和思路。开发祖国医药学宝藏，弘扬祖国文化，造福人类。

本课题基于目前对急性葡萄膜炎在治疗上的盲点，通过观察红芪多糖对TLR4 传导通路相关分子的影响，探寻红芪多糖干预LPS-TLR4 信号通路的具体靶点以及在基因转录水平对疾病的干预作用，以期解释红芪多糖在急性前葡萄膜炎中的具体抗炎机制，为疾病的靶向治疗提供新的方法和思路。我们通过患者外周血单个核细胞培养实验，发现红芪多糖促进LPS刺激后的单个核细胞分泌细胞因子，提示红芪多糖作为免疫调节剂参与炎症反应的过程；通过动物实验，发现红芪多糖通过抑制TRAF6核酸表达和蛋白降解缓解内毒素诱导的大鼠急性前葡萄膜炎眼内炎症反应，红芪多糖对EIU模型的干预途径主要是通过阻断TLR4-MyD88依赖途径而发挥的作用；通过基因芯片技术发现红芪多糖通过多条与炎症及免疫相关的信号传导通路发挥对内毒素诱导葡萄膜炎的抗炎作用。通过一系列筛选过程获得了多个备选的抗炎靶基因，其中通过上调富亮氨酸重复蛋白-1和下调基因集落刺激因子1以及通过IncRNA调控NF-ĸB发挥抗炎作用有较大的可能和研究价值；通过对Wistar大鼠增加内毒素耐受组的研究，发现内毒素耐受对内毒素诱导葡萄膜炎有保护作用。研究LPS预处理与红芪多糖干预对内毒素诱导的葡萄膜炎的影响，发现IRAK-M的上调与PI3K / AKT通路是最有可能参与其中的，从而为前葡萄膜炎的治疗提供了新思路和新靶点，也为其他感染和免疫性疾病提供重要的借鉴资料。