基于TLR4介导急性前葡萄膜炎的大黄多糖干预机制研究

葡萄膜炎是一种严重威胁视力的致盲眼病，前葡萄膜炎占所有葡萄膜炎的50~70%。尽管糖皮质激素和免疫抑制剂是治疗的首选，但由于副作用大，停药后病情易复发等原因而使应用受限；更为重要的是近年国内外研究认为急性前葡萄膜炎发病与革兰氏阴性细菌感染有关。在我们前期工作中，证明了急性葡萄膜炎的发病与Toll样受体4介导信号通路的激活密切相关，TLR4上游的阻断使炎症得以控制。基于对急性葡萄膜炎在发病机制和治疗上的盲点，本课题旨在立足于祖国传统医学，拟通过观察大黄多糖对葡萄膜炎中TLR4信号通路关键分子的影响，探讨大黄多糖对LPS诱导的HLA-B27（+）转基因大鼠葡萄膜炎Toll-4传导通路阻断的作用，寻找大黄多糖治疗TLR4介导的葡萄膜炎的可能靶点，从炎症的源头阻止葡萄膜炎的发生和发展，明确大黄多糖治疗葡萄膜炎中的抗炎机制，为防治葡萄膜炎的治疗提供一种新的思路和途径。

本课题基于目前对急性葡萄膜炎在发病机制和治疗上的盲点，通过观察大黄多糖对葡萄膜炎中TLR4 信号通路关键分子的影响，寻找大黄多糖治疗TLR4 介导的葡萄膜炎的可能靶点，从炎症的源头阻止葡萄膜炎的发生和发展，为防治葡萄膜炎的治疗提供一种新的思路和途径。第一阶段的研究中我们通过对RAW264. 7小鼠巨噬细胞系进行PBS正常对照组，地塞米松组，大黄多糖组，大黄多糖+地塞米松处理的不同处理，发现在体外细胞系中大黄多糖可以通过激活TLR4复合物及MyD88、NF-κB p65来激活巨噬细胞，因此理论上大黄多糖可以作为LPS的竞争性抑制物。第二阶段的研究中我们收集HLA-B27阳性急性前葡萄膜炎患者及白内障患者外周血并分离单核细胞，给予LPS刺激和大黄多糖干预，发现LPS可诱导HLA-B27相关前葡萄膜炎恢复期患者外周血PBMC培养上清液中细胞因子水平变化，大黄多糖可以抑制细胞因子释放，但其作用强度低于地塞米松。分析中发现可能与大黄的提取工艺与纯度相关，于是我们又将另一多糖含量多的中药红芪引入试验。第三阶段我们通过对wista大鼠给予PBS正常对照组，LPS组，LPS+地塞米松组，LPS+红芪多糖组处理，发现红芪多糖能通过抑制TLR4 介导的信号通路来抑制LPS诱导的急性前葡萄膜炎。我们通过对不同提纯工艺红芪多糖对TLR4 介导的信号通路的抑制作用研究得出结论：红芪多糖对虹膜睫状体组织内TLR4及相关分子通路、人外周血单核细胞表面TLR4及相关分子通路具有明显的抑制作用，红芪多糖可以从LPS- TLR4- MyD88-NF-κB传导途径的源头阻止炎症扩大，从而改善葡萄膜的免疫状态，达到抗炎的作用。为防治急性前葡萄膜炎提供一条新的思路和途径。