P16基因下调Survivin表达诱导肝癌细胞失巢性凋亡的分子机制

P16和Survivin基因对癌细胞增殖至关重要，P16失活和Survivin高表达存在于多数癌细胞中。我们的前期课题研究发现，癌细胞获得外源性P16表达复活后，通过下调Survivin表达、限制CDK4核输入，从而诱导癌细胞失巢性凋亡（Anoikis），发挥抗癌活性。但P16下调Survivin表达通过何种分子机制或何种信号通路，还存在疑问。我们预实验在部分癌细胞系中初步确定这种现象与Survivin启动子活性调控有关，可能涉及启动子的多种顺式序列及反式因子，并通过磷酸化调节影响PI3K-AKT信号分子的活性。本项目设计一系列Survivin突变型启动子并构建与Survivin启动子作用的反式因子C-myc、SP1表达载体，研究肝癌细胞P16复活下调Survivin表达的分子机制和信号通路。在此基础上，设计针对肝癌细胞Survivin表达调控的靶向性基因治疗策略，提高肝癌基因治疗的疗效。

P16和Survivin基因对癌细胞增殖至关重要，P16失活和Survivin高表达存在于多数癌细胞中。我们发现，癌细胞获得外源性P16表达复活后，通过下调Survivin表达、限制CDK4核输入，从而诱导癌细胞失巢性凋亡（Anoikis），发挥抗癌活性。P16下调Survivin表达与Survivin启动子活性调控有关，涉及启动子的多种顺式序列及反式因子，并通过磷酸化调节影响PI3K-AKT信号分子的活性。本项目设计一系列Survivin突变型启动子并构建与Survivin启动子作用的反式因子表达载体，研究肝癌细胞P16复活下调Survivin表达的分子机制和信号通路。在此基础上，设计针对肝癌细胞Survivin表达调控的靶向性基因治疗策略，提高肝癌基因治疗的疗效。我们的研究计划进展顺利，超额完成原定研究任务，达到预期研究目标：（1）观察到P16抑制癌细胞系Survivin表达，诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞，影响患者生存期及预后；（2）体内外证实Survivin启动子调控的腺病毒靶向增殖及对癌细胞的特异杀伤作用；（3）发现P16下调Survivin的表达是通过限制CDK4核定位而实现的，而OCT4上调Survivin表达是通过CCND1启动子活性调节而实现的；（4）发现腺病毒E1a基因增强外源P16诱导的SMMC-7721肝癌细胞凋亡；（5）腺病毒介导的BIRC5-shRNA能增强索拉菲尼诱导的肝癌细胞凋亡。发表论文15篇，其中SCI论文5篇，单篇最高影响因子超过10分；培养博士研究生1名，硕士研究生7名（其中3名已毕业）；研究成果入选2012年首届国家科学技术进步奖创新团队奖标志性成果。