胆汁淤积中鹅脱氧胆酸诱导核受体RXRa胞浆转移并调变RXRa:RARa转录活性的分子机制

胆汁淤积时肝细胞膜转运蛋白表达发生一系列变化，有助于降低胞内胆酸聚积、减轻毒性损伤，这是肝细胞的自我保护性反应，其中核受体RXRa在基因转录水平起核心调控作用。我们在前期研究中首次发现基本的初级胆酸CDCA诱导HepG2细胞RXRa自核内转移到胞浆的现象，其发生的分子机制和生物学意义尚不清楚。既往的研究提示不同的诱导物可能通过RXRa的不同氨基酸基团磷酸化诱导其胞浆转移、泛素化后，经蛋白酶体降解，泛素化的RXRa可能调变RXRa:RAR的转录活性，在胆汁淤积时肝脏膜转运蛋白的转录表达变化中起着重要的调控作用。本项目将围绕这一设想，研究CDCA刺激RXRa磷酸化氨基酸位点，诱导其胞浆转移的分子机制、最终归宿和对靶基因MRP2和MRP3的转录调控活性改变，揭示其生物学意义。本研究对阐明胆汁淤积时肝细胞的自我保护性反应机理具有重要理论意义；为临床寻找胆汁淤积的有效治疗策略提供新思路。

结题摘要. 胆汁淤积时肝细胞膜转运蛋白表达发生一系列变化，有助于降低胞内胆酸聚积、减轻其毒性损伤，这是肝细胞的自我保护性反应，其中核受体RXRa 在基因转录水平起核心调控作用。我们在前期研究中首次发现基本的初级胆酸CDCA 诱导HepG2 细胞RXRa 自核内转移到胞浆的现象，其发生的分子机制和生物学意义尚不清楚。既往的研究提示不同的诱导物可能通过RXR的不同氨基酸基团磷酸化诱导其胞浆转移、泛素化后，经蛋白酶体降解，泛素化的RXR可能调变RXR:RAR的转录活性，在胆汁淤积时肝脏膜转运蛋白的转录表达变化中起着重要的调控作用。本项目将围绕这一设想，研究CDCA 刺激RXR磷酸化氨基酸位点，诱导其胞浆转移的分子机制、最终归宿和对靶基因MRP2 和MRP3 的转录调控活性改变，揭示其生物学意义。研究结果发现：1、初级胆酸CDCA在刺激HepG2细胞后，可以通过JNK通路导致核受体RXR Ser260磷酸化，诱导核受体RXR由胞核到胞浆的重新分布；并与转运蛋白基因MRP3 mRNA高表达和MRP2基因转录抑制相关。2、CDCA可能激活胞浆内质网泛素-蛋白酶体系统，通过刺激关键的泛素连接酶3中的GP78表达上调，从而实现其泛素化降解。3、CDCA处理后RXRα: RARα表达量减少，解除了对MRP3表达的抑制作用、减弱了对MRP2表达的刺激作用，从而参与上调MRP3和下调MRP2的表达。本研究对阐明胆汁淤积时肝细胞的自我保护性反应机理具有重要理论意义；为临床寻找胆汁淤积的有效治疗策略提供新思路。