积雪草总苷对烧伤愈合双向调节作用的机制研究

临床上烧伤治疗中的一个困扰性难题是如何同时加速创伤愈合和防止瘢痕增生。中药积雪草的有效部位积雪草总苷既能明显促进烧烫伤皮肤创面愈合，又能抑制创伤愈合中的瘢痕形成，呈现独特的双向"疗伤"作用，其机制值得深入探究。.本项目在烧伤和增生性瘢痕复合模型小鼠，研究积雪草总苷的双向治疗作用及其与主要成分积雪草苷、羟基积雪草苷、积雪草酸和羟基积雪草酸等作用的相关性。围绕创面愈合和瘢痕形成过程的主线-胶原蛋白的合成和降解代谢，从成纤维细胞的异质性、转化生长因子β（TGF-β）的表达与功能、以及TGF-β1/Smads信号通路及其与其它细胞因子信号通路间的相互作用等，逐层、多环节探讨积雪草总苷促进烧伤创面良性愈合的多靶点作用机制，同时研究总苷中主要成分对胶原代谢正、负调控因素的影响。试图阐明积雪草总苷对烧伤愈合"多成分、多靶点"的双向调节作用机制和物质基础，为中药双向调节作用的现代研究提供借鉴和参考。

如何同时加速创伤愈合和防止瘢痕增生一直是临床烧烫伤治疗中面临的难题。中药积雪草既能促进创面愈合，又能抑制瘢痕形成，具有双向调节作用。本课题从创伤愈合和瘢痕形成两方面入手，揭示了积雪草总苷双向调节作用的物质基础及作用机制。. 创面愈合方面：1）羟基积雪草苷和积雪草苷（6, 12, 24 mg/kg）灌胃给药显著促进小鼠烫伤创面愈合，而等摩尔的羟基积雪草酸、积雪草酸（3, 6, 12 mg/kg）则无明显作用。体外实验与体内实验结果相一致，羟基积雪草苷和积雪草苷的作用是通过增加TGF-β1表达、促进TGF-β/Smad通路活化，进而导致I/III型胶原合成增多；2）羟基积雪草苷（10, 30, 100 μM）浓度依赖性保护血管内皮细胞，其机制可能通过抑制p38 MAPK/ERK磷酸化，进而抑制caspase-3活化，从而保护内皮细胞避免凋亡。表明积雪草总皂苷促进创面愈合的主要有效成分为羟基积雪草苷和积雪草苷，其机制与促进胶原合成、保护内皮细胞有关。. 瘢痕形成方面：1）羟基积雪草苷（10, 30, 100 μM）浓度依赖性促进瘢痕成纤维细胞凋亡，其机制可能通过调节Bax/Bcl-2平衡、引起细胞膜电位改变、激活caspase-9、进而活化caspase-3；2）羟基积雪草苷（10, 30, 100 μM）浓度依赖性抑制瘢痕成纤维细胞的迁移，而积雪草苷、羟基积雪草酸和积雪草酸则无明显的作用。羟基积雪草苷的作用机制可能通过抑制p38 MAPK及PI3K/Akt通路的活化，下调cofilin蛋白的磷酸化，进而抑制了瘢痕成纤维细胞的迁移；3）积雪草酸（10, 30 μM）能明显抑制TGF-β1诱导的瘢痕成纤维细胞I型胶原合成，而羟基积雪草苷、积雪草苷和羟基积雪草酸无显著的影响。积雪草酸的作用机制可能通过激活PPAR-γ通路，增加Smad 7的表达，从而抑制TGF-β1诱导的Smad 2/3磷酸化，阻止了下游的I型胶原合成。. 上述研究表明，积雪草总苷中各成分对正常皮肤和瘢痕成纤维细胞呈现不同的作用，其促进创面愈合的主要效应成分为羟基积雪草苷和积雪草苷，而抑制瘢痕形成的主要效应成分可能为羟基积雪草苷和积雪草酸。本研究揭示了积雪草总苷“双向疗伤作用”的物质基础和作用机制，为其临床应用提供了合理的解释，亦为中药双向调节作用的现代研究提供了示范。