调控恶性肿瘤细胞端粒稳定的miRNAs研究

恶性肿瘤细胞区别于正常细胞最大的特点之一是其端粒能够维持稳定从而克服Hayflick极限，获得无限增殖能力。最近研究发现microRNAs（miRNAs）在肿瘤的发生发展中起着重要作用。理论上分析某些特异miRNAs的异常表达跟恶性肿瘤细胞端粒的稳定有密切关系。本项目以头颈鳞癌为基础，根据其端粒维持机制不同分为端粒酶途径及ALT途径二种类型的肿瘤细胞，分别与正常细胞比较，应用microRNA芯片初步筛选出各自特异的差异miRNAs，然后应用实时定量RT-PCR技术验证这些差异miRNAs。进一步应用miRNAs表达载体过表达或者反义ASO片段抑制相应肿瘤细胞中特异miRNAs，检测肿瘤细胞端粒长度、端粒结构及生物学行为变化，最后得出调控恶性肿瘤端粒稳定的特定miRNAs。本研究从miRNAs水平探讨恶性肿瘤端粒维持机制，有望开辟一条以miRNAs为基础的、以端粒为靶向的恶性肿瘤治疗新途径。

端粒酶阳性的Hep-2、CNE1细胞hTERT抑制以后，端粒酶活性减低，90%的细胞凋亡，剩余的10％细胞仍能继续存活，其端粒维持机制为ALT机制；其增殖能力、侵袭转移及成瘤能力均显著受到抑制。应用Targetscan、PITA、miRanda软件分别预测可能参与调控hTERT的miRNAs各有数个，但是相同的miRNAs仅有三个：分别是miR-299-3p、miR-138、miR-886-3p。取miR-299-3p进行研究发现，喉癌Hep-2细胞中miR-299-3P表达阳性，转染miR-299-3p模拟物后hTERT mRNA显著高表达，具有剂量依赖关系。证实miR-299-3p可以直接调控hTERT的表达，是一个明显的促癌因素。另外，本项目发现Notch信号通路与端粒酶的关系密切；抑制其表达可以明显降低肿瘤细胞端粒酶活性，其具体机制有待进一步研究。本项目主要对miRNAs调控肿瘤细胞端粒稳定，进而对其生物学行为的影响进行了研究，完成了既定目标，达到预期目的，并在实验过程中发现了调控端粒酶活性的新途径，为肿瘤端粒靶向治疗开拓了新思路。