与J亚型禽白血病肿瘤发生发展相关的microRNA的鉴定与功能分析

J亚型禽白血病是危害肉鸡、蛋鸡、种鸡生产非常严重的肿瘤性疾病，miRNA 的表达异常导致疾病甚至肿瘤的发生，miRNA 可通过调控其靶标基因影响肿瘤的发生发展。禽白血病方面的miRNA研究还未见报道。本研究在前期研究的基础上，从前期用miRNA表达谱芯片筛选的22条上调和下调的miRNAs中，再用实时荧光定量RT-PCR方法在细胞水平对这22条miRNAs的表达进行验证，筛选出与芯片结果一致的显著上下调的miRNAs，着重对这些miRNAs的功能进行研究，确定miRNA调控的靶基因，建立miRNA及其靶基因之间的内在联系，阐明与J亚型禽白血病病毒介导肿瘤发生发展的miRNA 调控机理。本研究将为J亚型禽白血病的早期诊断和研究肿瘤形成的调控机制奠定基础，为控制J亚型禽白血病提供新思路和新策略。

本研究取得如下成果：1、本研究从不同种鸡、蛋鸡场分离鉴定毒株23株，有骨髓瘤型ALV-J和血管瘤型ALV-J，且基因序列分子变异比较大。该部分研究成果论文2篇“Complete Genome Sequence of a J Subgroup Avian Leukosis Virus Isolated from Local Commercial Broilers”和“Complete Genome Sequence of an Avian Leukosis Virus Isolate Associated with Hemangioma and Myeloid Leukosis in Egg-Type andMeat-Type Chickens”发表在《Journal of Virology》杂志上。2、建立了鸡miRNA功能研究平台，发现并鉴定12个与鸡J亚型白血病肿瘤形成的重要的miRNAs。还发现这些miRNAs与32773个鸡肝脏中表达的基因中的52个基因的转录显著相关。该研究论文“Aberrant expression of liver microRNA in chickens infected with subgroup J avian leukosis virus”发表在《Virus Research》杂志上。3、预测了miRNAs对应靶基因，验证了Gga-mir-375等7个miRNAs的生物学功能和对应靶基因的关系，探讨了致肿瘤模式。研究发现Gga-mir-375, gga-let-7i 和 gga-mir-125b在鸡的J亚型白血病肿瘤形成过程中发挥肿瘤抑制基因作用，Gga-mir-2127, gga-mir-1456 和 gga-mir-1790可能在肿瘤形成过程中起到致癌基因作用。J亚型白血病肿瘤的形成是由于ALV-J引起鸡内miRNAs表达紊乱，导致体内的癌基因与抑癌基因的在体内的平衡作用被破坏造成的。研究论文“gga-miR-375, a Novel Tumour-suppressor miRNA, Plays a Key Role in Tumorigenesis Post Subgroup J Avian Leukosis Virus Infection（ PONE-D-13-47062R1）”投稿至《PLOS ONE》，待发表。