接头蛋白FHL2促进肠癌细胞上皮－间充质转变的作用与机制

上皮间充质细胞转化(EMT)是癌侵袭与转移的标志性事件，伴有上皮特异分子如E-cadherin的表达丢失，和间质细胞特异分子如Vimentin的获得。表型改变的原因是一系列转录因子表达或胞内定位的改变。FHL2是一个蛋白相互作用的接头蛋白，可结合并调控多种转录因子,并且是胃肠癌细胞发生、失分化和维持恶性表型的关键分子。本项目拟进一步探讨FHL2促进肠癌EMT和侵袭转移的作用与机制。将通过构建全长与截短突变FHL2的稳定表达细胞株及siRNA干扰，过表达、敲低或拮抗抑制内源FHL2的表达或功能，调查FHL2对β-catenin功能的影响,探讨其通过snail抑制E-cadherin转录的机制。评价FHL2单独和在TGF-β诱导EMT中的作用，直接评价其对肠癌细胞粘附、侵袭与浸润的影响，并在裸鼠上皮和腹腔两种移植瘤模型中观察FHL2对癌浸润与播散的影响。完成后具有较大的理论与实用价值。

上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）是发生在细胞与细胞，细胞与细胞外基质间的变化，即上皮表型向间质表型的转化。在该过程中，恶性程度高的肿瘤细胞通常上皮标志的表达降低，细胞间的连接消失。同时，常常伴有细胞活动能力增强及间质蛋白的表达增加。街头蛋白FHL2（four and a half LIM domain 2）在蛋白与蛋白相互作用中发挥着连接及调节功能，同时还是许多转录因子的共激活剂，如：β-catenin、激活蛋白-1、CRE-结合蛋白、细胞外信号调节激酶2等。FHL2在胃肠道肿瘤中表达水平较高，对其恶性表型如生长、分化等的维持具有重要作用。在本项目中，我们进一步明确了FHL2在肠癌EMT和侵袭转移中的作用。发现FHL2在原发及转移肠癌组织中过表达，能够迁移至基底膜下基质部分； FHL2参与了TGF-β1介导的EMT；FHL2单独过表达亦可诱导EMT的发生。从分子机制上，FHL2与E-cadherine的分布和表达呈负相关，与β-catenin的核内表达及其转录活性成正相关，通过负性调节细胞膜性E-cadherin/β-catenin复合体的形成调控EMT的发生发展。同时，FHL2与EMT的关键转录因子Snail1在肠癌细胞和组织的表达谱高度相关，且两蛋白能够相互结合并作用，FHL2通过与E-cadherin启动子中的Snail1结合片段（E-box）结合参与对E-cadherin的负性调控。上述发现揭示了FHL2在肠癌EMT和侵袭转移中的促进作用及其机制，拓展了FHL2以癌基因身份在消化道肿瘤中的研究，丰富了Wnt/β-catenin信号通路，并为肠癌的靶向基因治疗提供了理论和科学依据。