RASSF1A抑制恶性黑色素瘤上皮-间充质转变和侵袭转移的作用与机制研究

RASSF1A是定位于人染色体3p21位点的重要抑瘤基因。我们前期研究发现RASSF1A在恶性黑色素瘤组织（MM）中表达下调，并且其表达与MM的淋巴结转移呈负相关。在恶性黑色素瘤细胞中高表达RASSF1A，抑制了AKT的磷酸化，引起细胞形态发生MET（间充质-上皮转变）样改变，抑制黑色素瘤细胞侵袭能力。本项目拟采用多种细胞模型和裸鼠移植瘤模型进一步研究RASSF1A对恶性黑色素瘤EMT（上皮-间充质转变）和侵袭转移的抑制作用；进一步研究RASSF1A对PI3K/AKT通路的影响，探讨RASSF1A是否通过负调控PI3K/AKT信号通路抑制恶性黑色素瘤EMT和侵袭转移。最后，运用免疫组化研究RASSF1A、PI3K/AKT关键分子以及EMT相关分子在恶性黑色素瘤组织中的表达与临床意义。本项目的完成，将阐明RASSF1A抑制恶性黑色素瘤EMT和侵袭转移的作用与分子机制。

RASSF1A是一个广为人知的抑瘤基因候选者，我们前期研究表明RASSF1A基因稳定表达通过下调PI3K/AKT信号通路抑制黑色素瘤A375细胞生长与增殖。PI3K/AKT信号通路是调控上皮-间质变(Epithelial-mesenchymal transition,EMT))的关键通路，因此我们预期RASSF1A具有抑制EMT和侵袭转移的作用。在本项目实施过程中，我们意外地发现RASSF1A 在A375细胞中具有前所未知的双向效应。一方面，与前期研究一致，RASSF1A抑制A375细胞增殖与活力；另一方面却又促进（而不是抑制）A375细胞EMT和侵袭转移。通过基因芯片结合生物信息学研究发现RASSF1A上调炎症因子IL-6，并且IL-6位于RASSF1A调控的A375细胞差异表达基因网络中央节点。我们证明RASSF1A对A375细胞的双重效应是由IL-6介导的，RASSF1A通过上调IL-6促进p21（抑制生长）、vimentin（促进侵袭）表达，发挥抑制细胞增殖和促进EMT的双向效应。RASSF1A激活了A375细胞炎症相关的STAT3信号通路，并且RASSF1A上调IL-6、p21、vimentin表达的作用依赖于激活STAT3。.在本项目资助下，我们进一步扩展了EMT标志分子vimentin在肿瘤转移中的作用。构建了靶向vimentin的shRNA慢病毒，研究证明干扰vimentin表达显著抑制了A375、CNE2细胞的侵袭转移能力，但是不影响细胞生长。干扰vimentin抑制了A375、CNE2细胞Rho GTPase信号通路，引起血管形成能力降低、MMP2/9表达下降，证明vimentin是抗肿瘤转移的有效靶点。.综上所述，我们遵照客观求是的原则，根据实验观察到的现象对研究方案进行了较大的调整，尽管获得的结果与项目立项之初设想的有所不同，但我们的研究揭示了RASSF1A过表达对A375细胞发挥双向效应的分子机制，同时证明了EMT标志分子vimentin是抗肿瘤转移的有效靶点。本项目已发表论文2篇，其中SCI收录论文1篇并被选为当期封面论文，另有2篇研究论文投稿。项目负责人还参与发表标注项目资助论文7篇，其中SCI收录5篇。项目实施期间，参与项目研究的硕士生1人提前攻读博士学位，预期在2015年12月完成毕业论文答辩。