口服型VEGFR-3 DNA 疫苗在抑制肺癌转移中的作用研究

血道和淋巴道转移是恶性肿瘤形成转移和复发、影响治疗效果和导致患者死亡的主要原因之一。抑制肿瘤新生血管和淋巴管的生成，是治疗恶性肿瘤转移和复发的有效措施。我们通过对口服VEGFR-2 DNA疫苗的研究发现，其对结肠癌和肺癌新生血管的形成有明显的抑制作用。VEGFR-3信号传导途径在肿瘤血管和淋巴管生成中起重要作用。本研究仍拟以VEGFR-3为靶点，继续克隆VEGFR-3基因胞外区片段，构建重组质粒，以减毒沙门氏菌SL3261为载体，利用基因工程技术研制口服VEGFR-3 DNA疫苗，建立小鼠肺癌动物模型，研究其抑制肿瘤血管、淋巴管生成的作用机制和抗肿瘤生长、复发及转移的效果。

1）背景及方向：血道和淋巴道转移是恶性肿瘤形成转移和复发主要原因，是影响治疗效果和导致患者死亡的原因之一。抑制淋巴管的生成，是治疗恶性肿瘤的有效措施。VEGFR-3信号传导途径在淋巴管生成中起重要作用。本研究以VEGFR-3为靶点，以减毒沙门氏菌SL3261为载体，利用基因工程技术研制口服VEGFR-3 DNA疫苗，建立小鼠肺癌动物模型，研究其抑制肿瘤淋巴管生成的作用机制和抗肿瘤生长的效果。 2）主要内容：克隆小鼠 VEGFR-3胞外区cDNA全长序列。构建重组质粒pcDNA3.1-VR-3；将pcDNA3.1-VR-3转化感受态减毒沙门氏菌SL3261，制备以SL3261为载体的口服VEGFR-3 DNA疫苗，观察其生物学活性；将C57BL/6小鼠随机分为治疗性实验组（接种后免疫）与预防性实验（接种前免疫）,各组再分为疫苗组、空质粒组和空细菌组，建立肺癌皮下移植瘤模型。隔周口服免疫三次，观察各组小鼠肿瘤体积，淋巴细胞及细胞因子变化，抗体及CTL反应等。3)重要结果：①克隆了VEGFR-3胞外区cDNA全长序列，并构建了重组质粒pcDNA3.1-VR-3，Western blotting证实目的基因可在COS-7细胞中表达；②成功制备了以SL3261为载体的口服VEGFR-3 DNA疫苗。疫苗组的抗体水平高于空质粒组、空细菌组，均有明显差异（P<0.05）；特异性细胞毒性T 淋巴细胞体外杀伤活性实验结果显示：疫苗组小鼠脾淋巴细胞对靶细胞的杀伤率高于空质粒组和生理盐水组（P<0.05）。③口服VEGFR-3 DNA疫苗抑制小鼠Lewis肺癌皮下移植瘤生长作用的实验研究结果表明:预防性实验和治疗性实验组中，疫苗组的在体肿瘤生长、微淋巴管密度均低于空质粒组或空细菌组（P<0.05）；CD3+、CD4+及 CD8+T细胞检测,疫苗组高于空质粒组和空细菌组, 差异有统计学意义（P<0.05）;细胞因子检测疫苗组细胞因子TNF、IFN-γ均较空质粒组与空细菌组高（P<0.05）。疫苗组生存期较空质粒组、空细菌组延长（P<0.05）。4)科学意义: 以减毒沙门氏菌SL3261为载体的口服VEGFR-3 DNA疫苗能激活机体特异性的体液免疫及细胞免疫；该DNA疫苗能通过抑制肺癌淋巴管生成而抑制小鼠Lewis肺癌皮下移植瘤的生长，有望成为肿瘤治疗中的新型疫苗。