PI3K/AKT抑制剂逆转T细胞淋巴瘤/白血病GSI耐药的研究

淋巴瘤是原发于淋巴组织的恶性肿瘤，分为霍奇金淋巴瘤（HL）和非霍奇金淋巴瘤(NHL)。NHL按照细胞类型分为B细胞和T/NK细胞淋巴瘤。T细胞淋巴瘤侵袭性强，预后差。虽然T细胞淋巴瘤患者的生存质量已得到显著改善，但多数患者仍会复发，对化疗药物耐药，预后不良。Notch1、PI3K/AKT/mTOR信号途经在淋巴细胞增殖分化过程中起重要作用，Notch1、PI3K/AKT/mTOR通路的异常与淋巴瘤发生和预后紧密相关。γ-分泌酶抑制剂（GSI）抑制胞内Notch(ICN)的释放从而抑制Notch信号通路，成为治疗淋巴瘤新的靶向药物。但是很大部分T细胞淋巴瘤对GSI耐药，提示需要通过联合治疗纠正其它关键通路的异常。本研究通过联合PI3K/AKT抑制剂逆转T细胞淋巴瘤对GSI耐药，同时观察Notch1、PI3K/AKT/mTOR信号通路的变化以探讨其分子机制，为T细胞淋巴瘤的治疗提供新的思路。

T细胞白血病/淋巴瘤（TLL）是一组异质性疾病，侵袭性强，预后差，目前一般采用以化疗为主的综合方案进行治疗。虽然近二十年来TLL的生存率取得了很大改善，但很多患者往往产生耐药，进而复发，总体治疗效果仍不理想。因此寻找新的治疗方法显得尤为重要。. Notch1信号的异常激活与TLL的发病密切相关。约50%TLL病人存在Notchl激活的突变 ，说明Notchl的异常激活是TLL的重要发病机制。γ-分泌酶抑制剂（GSI-I）抑制Notch1的胞内段（NICN）的释放从而抑制Notch1信号通路，有希望成为新的靶向药物。另一方面，蛋白酶体抑制在恶性血液系统疾病中已经取得了较好的疗效，硼替佐米能够抑制多种肿瘤的生长，文献报道硼替佐米对TLL也有明显的抑制作用。. 本课题通过体内外实验探讨了GSI-I和硼替佐米联合应用对TLL的影响。我们选用了4个TLL 细胞株，Jurkat，MOLT-4，HuT78和H9。与单用一种药物相比，两药联合应用后细胞生存，细胞增值和克隆形成能力均明显降低，凋亡细胞显著增高。为了更深入地探讨两药协同诱导细胞凋亡的分子机制，我们对一些与细胞增殖和凋亡相关的信号传导通路进行了研究。免疫印迹结果表明，当两药联合应用后Notch1及其胞内活性片段和其下游靶蛋白c-Myc 和 HES1水平明显降低，同时磷酸化AKT和ERK水平明显降低，全蛋白中磷酸化IKKα/β and IκBα水平明显降低，导致核内NF-κB水平明显降低。联合应用组磷酸化JNK和p38MAPK水平都明显升高。总之，GSI-I和硼替佐米联合应用削弱了细胞保护性信号传导通路，促进了细胞应激相关性通路。在患者原代TLL中，GSI-I和硼替佐米联合应用48小时后，肿瘤细胞生长抑制达到70%以上，而对于正常T细胞没有明显生长抑制作用，从而保证了临床用药的安全性。最后通过小鼠移植瘤模型研究了GSI-I和硼替佐米联合应用在体内的抗白血病/淋巴瘤活性。裸鼠在皮下接种Jurkat细胞后，接种部位都出现了瘤块。小鼠分成4组(对照组，GSI-I组，硼替佐米组，联合用药组)。联合治疗组裸鼠的瘤体积明显小于对照组及单药组裸鼠的瘤体积，而肿瘤细胞凋亡数明显高于对照组及单药组。. 总之，GSI-I和硼替佐米联合治疗产生协同作用，诱导TLL细胞发生凋亡，为TLL患者提供一种有效合理的新方案。