白藜芦醇改善雌激素缺乏衰老大鼠记忆及NMDA受体介导的突触可塑性信号通路的机制研究

女性绝经后痴呆是老年记忆障碍的最主要的类型。氧化应激以及体内雌激素缺乏是其发生的两个最必要的和充足的危险因素。白黎芦醇具有强的抗氧化性及选择性雌激素受体调节剂的活性，提示白藜芦醇具有预防老年女性绝经后痴呆的潜在活性，并且可以避免雌激素替代疗法引起的如增加子宫内膜癌等的严重副作用。寻求调节NMDAR功能的配体，成为近年来治疗老年记忆减退的新的分子靶点。.本课题拟采用动物体内、外实验相结合的方法，研究白藜芦醇对雌激素缺乏衰老大鼠的记忆改善作用及NMDA受体介导的突触可塑性信号通路的改变机制。分别采用Morris水迷宫实验、跳台实验以及穿梭实验检测大鼠的空间记忆、被动回避和主动回避记忆能力。机制研究中，分别检测大鼠海马和皮质以及培养的海马神经细胞中的NMDAR-CaMKII-PKC/PKA-CREB-BDNF信号通路的改变，同时利用时利用3H-MK801 结合实验来反映NMDAR活性的特异性。

本研究采用绝经期AD动物模型（去卵巢合并D-半乳糖注射）和原代海马神经细胞培养（利用H2O2以及谷氨酸制备细胞损伤模型）相结合的方法，研究白藜芦醇对雌激素缺乏衰老大鼠的记忆改善及NMDA受体介导的突触可塑性信号通路的改变机制。研究中，我们利用Morris水迷宫、跳台实验以及穿梭实验检测大鼠的记忆，利用开阔场实验检测大鼠的自主活动能力。检测了海马组织及细胞的形态学改变（光镜、透射电镜、扫描电镜、Nissl检测、NeuN标记）、细胞存活率（流式细胞、CCK-8、LDH、MTT）、神经细胞的鉴定（Tubllin-3β）、Western-blot以及Real-time检测NMDAR-CaMKII-PKC/PKA-CREB-BDNF信号通路的蛋白和基因的改变。研究结果显示：（1） 去卵巢合并腹腔注射D-半乳糖可以导致大鼠记忆的明显减退；（2）白藜芦醇可以明显改善去卵巢合并腹腔注射D-半乳糖大鼠的记忆能力，且以40mg/(kg• d)及80mg/(kg• d)组效果明显；（3）白藜芦醇改善记忆的可能机制是：提高机体的抗氧化水平、减少了海马组织中Aβ的表达量、抑制了神经元数量的减少、调节NMDA受体介导的信号通路的蛋白和基因的表达、降低大鼠机体的炎性因子的水平；（4）白藜芦醇在本实验的研究剂量内未发现对子宫的明显副作用；（5）白藜芦醇可以保护H2O2以及谷氨酸对神经细胞的损伤，其作用也与其保护对NMDAR-CaMKII-PKC/PKA-CREB-BDNF信号通路的改变有关。