CD9负调控创面移行表皮细胞表达MMP-9的分子机制研究

表皮细胞移行是创面再上皮化的限速步骤，探讨其分子调节机制是目前创面愈合研究的焦点和热点。我们前期发现CD9是调节表皮细胞移行的重要功能分子，其作用与负调控移行表皮细胞表达MMP-9有关，但具体调控机制尚不清楚。基于文献依据，本研究提出CD9与整合素αvβ6形成复合体，CD9通过调节整合素αvβ6而负调控MMP-9表达的假设；并拟首先观察创面移行表皮细胞中CD9与整合素αvβ6的表达、定位及相互作用；继而阐明整合素αvβ6在CD9负调控MMP-9表达中的重要性；从表达到分布，明确CD9调节整合素αvβ6的可能环节，并进一步探寻CD9影响整合素ανβ6信号传递的分子基础；从而提出CD9/整合素αvβ6复合体是调节创面移行表皮细胞表达MMP-9的重要机制的新观点，这对深入揭示CD9调节创面表皮细胞移行的作用机理，深化对创面愈合乃至创面慢性不愈病理发生机制的认识，有重要的理论意义和潜在的临床价值。

创面再上皮化包括表皮细胞的移行、增殖和分化。基于慢性不愈创面主要表现为表皮细胞的移行功能缺损，表皮细胞移行被视为创面再上皮化的限速步骤，探讨其分子调节机制是目前创面愈合研究的焦点和热点。我们前期发现CD9是调节表皮细胞移行的重要功能分子，其作用可能与负调控移行表皮细胞表达MMP-9有关，但具体调控机制尚不清楚。本研究发现，无论是在大鼠创面亦或是培养的表皮细胞单层创面模型中，CD9在创缘表皮细胞中均呈低表达，进一步验证了前期结果。通过体外单层人表皮细胞创面模型，我们观察了CD9转染或沉默对表皮细胞表达MMP-9和创面愈合的影响，发现CD9表达水平与创面愈合和MMP-9的表达水平呈负相关，且CD9低表达的促愈和促进表皮细胞移行的作用能被MMP-9抑制剂显著削弱，提示CD9通过负调控MMP-9的表达发挥调节表皮细胞移行和创面愈合的作用。通过在体大鼠创面愈合模型，我们发现创面愈合过程中CD9与整合素ανβ6的表达呈反向关系；通过离体建立CD9稳定低表达表皮细胞株和整合素ανβ6功能性阻断实验，我们发现，尽管CD9与整合素ανβ6存在良好的共定位关系，但二者并不存在相互作用，相反二者可能通过相互调节作用，进而影响了MMP-9的表达，即：CD9低表达可诱使整合素ανβ6表达上调，进而使MMP-9的表达分泌增多，若抑制整合素ανβ6则MMP-9的表达和分泌受抑，表明CD9低表达促进MMP-9表达分泌的作用与其诱导整合素ανβ6表达有关；反过来，若阻断整合素ανβ6的功能，可使CD9的表达显著升高，伴随MMP-9的表达受抑，提示整合素ανβ6信号途径可反馈调节表皮细胞CD9表达，这一发现可能解释了在体情况下MMP-9在创面愈合早期呈诱导表达，而在创面愈合后期表达下降的发生机制。最后，通过信号分子的筛查实验，我们发现JNK途径在CD9负调控MMP-9的表达中起关键作用。上调CD9表达可抑制JNK活化，反之则促进了JNK活化；采用SP600125抑制JNK活性，可使表皮细胞的基础MMP-9表达和CD9低表达诱导MMP-9表达增多的作用显著受抑，提示JNK是介导CD9负调控表皮细胞表达MMP-9的重要信号分子。上述研究进一步揭示了创面愈合过程中MMP-9表达的调节分子机制，对阐明生理性创面愈合乃至创面慢性不愈的发生机理具有重要的理论价值。