NK/T细胞淋巴瘤中EB病毒DNA整合对转录因子hLBH活性和下游AP-1/PD-L1通路表达的影响

Epstein-barr virus (EBV) correlates closely with NK/T cell lymphoma（NKTCL）. Our previous research indicated that the expression of AP-1-dependent PD-L1 increased obviously in EBV+NKTCL . Whole genome sequencing revealed a recurrent integration of EBV DNA in chromosome 2p 23.1 region（ch2 p23.1/R-interg）in NKTCL cell lines, and lead to the activity alteration of hLBH,which could regulate AP-1 expression as a transcription factor. So it was hypothesized that ch2 p23.1/R-interg could increase AP-1-dependent PD-L1 pathway expression by enhancing hLBH transcriptional activity. In this study, we intend to capture single-cell population in NKTCL tissue by laser microdissection , detect incidence and heterogeneity of ch2 p23.1 / R-interg in NKTCL, and restore the wild-type ch2 p23.1 site by CRISPR. And then evaluate the effect of ch2 p23.1 / R-interg to hLBH transcriptional activity, expression of AP-1/PD-L1 pathway and biological characteristics of NKTCL. In conclusion,we wish provide a novel research idea and potential therapeutic target for NKTCL.

EB病毒（EBV）感染与NK/T细胞淋巴瘤（NKTCL）关系密切。我们前期研究证实EBV+ NKTCL细胞系中存在AP-1依赖的PD-L1表达上调，全基因组测序发现chr2p23.1区域存在高频的EBV DNA整合（ch2p23.1/R-interg），推断与该区域调控AP-1的转录因子hLBH活化有关。因此我们猜想ch2p23.1/R-interg可通过增强hLBH转录活性上调AP-1/PD-L1表达。本课题拟利用激光显微切割捕获NKTCL组织中EBV+单细胞，检测ch2p23.1/R-interg的发生频率，分析与临床因素的相关性；利用CRISPR 技术恢复野生型ch2p23.1位点，明确ch2p23.1/R-interg对hLBH转录活性和AP-1/PD-L1表达的作用及机制；初步探索对NKTCL细胞恶性生物学行为的影响，为NKTCL发生机制研究提供新的思路和潜在的免疫治疗靶点。

NK/T细胞淋巴瘤（NKTCL）是我国较常见的淋巴瘤亚型。EB病毒（EBV）是NKTCL的主要致病因素，具体机制尚不清楚。我们前期研究发现EBV DNA可以整合在NKTCL宿主细胞基因组上，可能是NKTCL发生发展的关键因素。本课题中，我们进一步对NKTCL细胞系和肿瘤组织进行了全基因组测序、病毒序列捕获和生物信息学分析，发现在宿主基因组2号染色体短臂23.1 区域（chr2 p23.1）存在高频的EBV DNA整合，引起包括 LTBP1、LBH、XDH、YPEL5 在内的多个基因位点改变，导致PD-L1表达水平和LTBP1/TGFβ通路等免疫微环境的改变。另外，我们针对127例NKTCL组织和细胞系进行了全外显子测序，首次发现GNQ、LTBP1 等基因存在高频突变，与患者疗效预后相关。. 在此基础上，我们开展了一系列EBV相关的NKTCL生物学功能和基因改变的研究。包括对EBV阳性的NK/T淋巴组织增殖疾病PD-1、PD-L1/2表达水平的检测，结合上述免疫微环境改变，分析与免疫治疗疗效和预后的相关性。通过建立NKTCL耐药细胞系，我们分选和鉴定了NKTCL侧群细胞，并进行功能和机制研究，发现ABCG2等ABC家族蛋白和Nanog等干性相关基因在NKTCL耐药机制中发挥重要作用。我们对NKTCL患者的临床回顾性研究，进一步评估了复发难治患者EBV DNA定量以及EBER表达水平和预后关系。我们还把研究扩展至血管免疫母细胞淋巴瘤、T淋巴母细胞淋巴瘤和弥漫大B细胞淋巴瘤，分析了EBV相关因素与临床治疗疗效和预后的关系。. 总之，我们围绕EBV整合NKTCL宿主基因组研究，发现了一系列可能影响NKTCL发生发展的基因改变和生物学因素，结合临床研究，进一步提出了EBV相关的临床预后指标，为EBV在淋巴瘤和其他实体肿瘤中的致病机制研究提供了理论依据，为淋巴瘤临床诊疗提供可能的标记物和治疗靶点。