淫羊藿素下调EB病毒LMP1表达抑制鼻型NK/T细胞淋巴瘤的作用及机制

Nasal natural killer/T-cell lymphoma，（NKTCL）is highly associated with EBV infection, with significant aggressiveness and poor prognosis. To date there's no effective chemotherapy. EBV LMP1 is thought to play an important role in NKTCL. It's observed that several cell signal transduction pathways involved in this disease. Our previous work shows that Icaritin can inhibit NKTCL proliferation, induce the cells apoptosis, inhibit LMP1, pAKT and pSTAT3. So we hypothesize that Icaritin can inhibit NKTCL by down-regulating LMP1, then influencing JAK-STAT pathway, AKT pathway and PDGF pathway. In this project, the anti-tumor effectiveness of Icaritin, as well as the interaction of LMP1 and cell signal pathways involved were investigated in vitro and in vivo. By exploring the mechanisms on how Icaritin inhibits NKTCL proliferation and induces apoptosis by down-regulating LMP1, Our project will have direct application for developing possible novel treatment approaches for NKTCL.

鼻型NK/T细胞淋巴瘤（Nasal natural killer/T-cell lymphoma，NKTCL）与EBV的感染高度相关。其发病机制不清，侵袭性强，预后差。现有的研究表明，NKTCL细胞中多个信号通路失调，EBV表达的LMP1是重要的肿瘤相关因子，但其致病机制未明。本课题组前期研究发现淫羊藿素作用于NKTCL后LMP1的表达下降，同时肿瘤细胞增殖受到抑制、细胞停滞在G2/M期，凋亡增加，JAK-STAT和AKT信号通路受到抑制。因此设想淫羊藿素通过下调LMP1影响细胞内多个信号通路，从而发挥抑制肿瘤的活性。本项目拟通过体外和体内实验探索淫羊藿素对NKTCL细胞的抑瘤活性及其相关的分子机制，明确淫羊藿素通过下调NKTCL细胞中EBV的LMP1表达，抑制多条失调的细胞内信号转导通路，从而发挥抑制肿瘤的作用。本研究将为探索NKTCL新的治疗靶点及药物提供理论依据。

鼻型NK/T细胞淋巴瘤（Nasal natural killer/T-cell lymphoma，NKTCL）与EBV的感染高度相关。其发病机制不清，侵袭性强，预后差。现有的研究表明，NKTCL细胞中多个信号通路失调，EBV表达的LMP1是重要的肿瘤相关因子，但其致病机制未明。本课题观察了中药有效成分淫羊藿素对NKTCL对影响及其可能对机制。结果发现淫羊藿素作用于NKTCL后EBV编码对LMP1的表达下降，同时肿瘤细胞增殖受到抑制、细胞停滞在G2/M期，凋亡增加，JAK-STAT和AKT信号通路的抑制为重要的机制。通过高通量RNA测序（RNA-seq）分析提示淫羊藿素作用于NKTCL与DNA损伤修复反应（DDR）及细胞代谢过程有关。而在对NKTCL病人肿瘤组织切片检测中也发现虽然肿瘤中有DDR的激活，却由于某种原因使其下游的Chk2分子及p53分子未被激活，因此细胞没有行使DNA损伤修复或者促使细胞凋亡而发生肿瘤。因此我们的研究中重点关注了淫羊藿素对NKTCL细胞中DDR相关通路的影响以及对细胞氧化应激状态的作用。结果发现淫羊藿素在诱导NKTCL凋亡的同时能够上调细胞中的ATM、Chk2、p53及H2A.x的磷酸化，且此作用与依托泊苷呈现协同效应，证实其通过诱导DDR达到抗肿瘤的目的。另一方面，淫羊藿素能够增加NKTCL细胞内活性氧（Reactive Oxygen Species, ROS）含量从而上调细胞的氧化应激水平；用SOD（Superoxide dismutase）和CAT（Catalase）清除了细胞中经淫羊藿素上调的ROS后，可见被淫羊藿素诱导的凋亡细胞数量也得到了抑制，同时细胞的DDR也得到了逆转。说明淫羊藿素诱导NKTCL细胞凋亡的过程中，通过增加细胞的氧化应激造成DNA损伤修复反应，最终引起了NKTCL的凋亡。本研究将为探索NKTCL新的治疗靶点及药物提供理论依据。