通过Nrf2通路探讨全真一气汤调控COPD氧化应激失衡的机制

Chronic obstructive pulmonary disease (COPD) is the world's fourth largest fatal disease, is closely related to its pathogenesis of oxidative stress imbalance. Nuclear factor NF-E2-related factor (Nrf2) involved in cell resistance to oxidative stress play a central role of Nrf2 pathway is discovered so far, the most important endogenous anti-oxidative stress pathway. Quan-Zhen-Yi-Qi Decoction(QZYQD) was found by the Qing Dynasty Feng Chu Bringing created by attending all consumptive severe, the preliminary studies confirmed that the treatment of COPD and COPD exacerbations of effective Recipe composed not for sputum, cough, dyspnea, and other drugs, suggesting that the role of point upstream pathological link in COPD, may improve the hypoxia regulate the signaling pathway in patients with long-term hypoxia-induced oxidative stress imbalance. This study applied molecular biology techniques to observe the effect of QZYQD to hypoxia model of oxidative stress intervention , and investigate the antioxidant mechanisms; and then observe the QZYQD intervention in COPD patients with acute exacerbation of rat model of oxidation should excitations, the first to investigate the role of the molecular regulation of in ERK/Nrf2/HO-1 signal path. To set biological foundation for QZYQD in the clinical development , provide new ideas for COPD treatment,and provide the basis for a variety of antioxidant treatment of chronic diseases.

慢性阻塞性肺疾病（COPD）是目前世界上第四大致死性疾病，其发病机制和氧化应激失衡密切相关。核因子NF-E2相关因子（Nrf2）在参与细胞抗氧化应激中发挥核心作用，Nrf2通路是迄今为止发现的最为重要的内源性抗氧化应激通路。全真一气汤由清代冯楚瞻所创，主治一切虚劳重症，我课题组前期研究证实其治疗COPD及COPD加重期有效。但方药组成中并无针对痰、咳、喘等的药物，推测作用点在COPD上游病理环节，可能与改善"缺氧"，调节患者长期缺氧所致的氧化应激失衡中信号通路相关。本研究应用分子生物学技术，首次观察全真一气汤对多个缺氧模型的氧化应激干预作用，探讨其抗氧化机制；进而观察全真一气汤干预COPD急性加重期模型大鼠氧化应激作用，首次探讨其在ERK/Nrf2/HO-1信号通道方面的分子调控作用。为临床开发全真一气汤提供分子生物学基础；为COPD治疗提供新思路；为多种慢性疾病的抗氧化治疗提供依据。

摘要.背景：慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease ,COPD)是一种以进行性不完全可逆性气流受限为特征的疾病,与氧化应激密切相关，是目前世界上第4大致死性疾病。核因子NF-E2相关因子（Nrf2）在参与细胞抗氧化应激中发挥核心作用。全真一气汤方由熟地黄、麦冬、白术、人参、熟附子、牛膝、五味子组成，临床上广泛用于治疗各种虚弱性疾病，我课题组前期研究证实全真一气汤及其多糖有增强免疫的作用。.研究内容：全真一气汤多糖的提取纯化研究;全真一气汤多糖及浸膏改善缺氧参与抗氧化作用的研究；氧化应激失衡在COPD模型小鼠的作用及全真一气汤的干预作用研究；Nrf2信号通路在COPD中的作用及全真一气汤的调控作用研究.关键数据：确定了全真一气糖汤多糖的提取纯化工艺：水提→醇沉→脱蛋白→除色素→透析，该工艺条件下，可制备得到高纯度多糖。全真一气汤组及多糖组小鼠耐缺氧能力和耐急性脑缺血性缺氧能力均比正常对照组强。全真一气汤的多糖对于总抗氧化能力（T-AOC）、谷胱甘肽（GSH）、一氧化氮合酶（TNOS）活力均有显著作用，浸膏对总抗氧化能力（T-AOC）和羟脯氨酸（Hyp）有显著作用（Ｐ＜0.05 ）。COPD模型小鼠中给药组与熏烟组相比，全真一气汤水煎液高剂量组体重增加明显，水煎液组合多糖组气道阻力(RI)降低，有统计学意义（Ｐ＜0.05 ）。肺组织病理切片模型组部分肺大泡形成；给药组肺泡结构完成，无代偿性肺气肿形成。与模型组相比，全真一气汤水煎液和多糖组对白细胞介素6（IL-6）、白细胞介素8（IL-8）、细胞外调节激酶（ERK1/2）均有显著作用（Ｐ＜0.05 ）。全真一气汤多糖刺激A549细胞，较香烟提取物刺激组氧化型谷胱甘肽（GSSG）升高明显，白细胞介素6（IL-6）、白细胞介素8（IL-8）含量减少,NF-E2相关因子2（Nrf2）、细胞外调节激酶（ERK1/2）表达量下调，均有统计学差异（Ｐ＜0.05 ）。.科学意义：本课题考察了几种常规除色素和纯化方法对多糖含量的影响，初步确定了脱蛋白、除色素及纯化的方法，为多糖的精制奠定了基础。应用分子生物学技术，首次观察全真一气汤对多个缺氧模型的氧化应激干预作用，探讨其抗氧化机制，进而观察全真一气汤干预COPD急性加重期模型小鼠氧化应激作用，首次探讨其在Nrf2通路方面的分子调控作