介导巨噬泡沫细胞胆固醇逆转运配体的靶定位研究

促进动脉粥样硬化（AS）泡沫细胞内胆固醇逆转运(RCT) 是干预治疗AS的重要靶点。载脂蛋白A-1（apo-A1）及ATP结合盒转运子A1（ABCA1）直接介导了RCT，上调内源性apo-A1、ABCA1基因蛋白表达，是增强泡沫细胞RCT途径最可行的目标。前期研究发现一种源于oxLDL化学合成配体7-酮基-9羧基壬烷（oxLig-1），能够上调内源性apo-A1基因35倍表达，并伴随ABCA1同步上调近3倍表达。模拟对接计算和激活实验显示oxLig-1是过氧化物酶体增殖物激活受体PPARγ的上调激活配体。本课题拟将oxLDL泡沫细胞为实验对象，进一步研究确认在apo-A1和HDL介导下，oxLig-1及其甲基化或酯化结构刺激激活PPARγ以及合作下游基因肝脏X受体（LXRs) 基因表达，观察受这一通路调控的ABCA1基因表达，探讨oxLig-1促进泡沫细胞胆固醇外流和RCT的分子机制。

促进动脉粥样硬化（AS）泡沫细胞内胆固醇逆转运(RCT) 是干预治疗AS的重要靶点。载脂蛋白A-1（ApoA1）及ATP结合盒转运子A1（ABCA1）直接介导了RCT，上调内源性ApoA1、ABCA1基因蛋白表达，是增强泡沫细胞RCT途径最可行的目标之一。本课题研究发现一种新型配体7-酮基-9羧基壬烷（oxLIg-1），基因芯片结果显示能够明显上调巨噬细胞内源性ApoA1基因35倍表达，并伴随ABCA1同步上调近3倍表达；进一步的分子机理研究显示oxLig-1在巨噬细胞通过促进过氧化物酶体增殖物激活受体（PPARγ）及其下游基因CD36受体途径协同作用上调，分别经由LXR和JNK1/2，显著促进ABCA1总蛋白和mRNA表达，促进细胞荧光标记胆固醇外流明显增加10%（P< 0.05）；并经由p38 MAPK-PPARα通路显著上调肝细胞系HepG2的ApoA1基因与蛋白表达。利用AUTODOCK 3.0软件分子模拟半柔性对接（DOCK）计算显示oxLig-1结构“-COOH”可以与PPARγ或α的配体结合区LBD中His-449位点形成氢键，氧原子则与一个新的极性氨基酸位点Lys-367形成氢键，这是oxLig-1不同于PPARγ或α其他配体的氢键结合位点。OxLig-1的7-KC环状结构则与非极性氨基酸形成疏水作用。对oxLig-1的-COOH进行甲基化封闭，显示甲基化的oxLig-1只能结合LBD疏水键，不能够形成氢键，实验结合活性降低了40%，显示oxLig-1结合活性中心可能在“COOH”端。SD大鼠实验给予oxLig-1（10mg/kg）与降脂药物辛伐他汀比较显示了相似的调脂作用。口服oxLig-1连续3周肝细胞脂肪变性程度和肝脏指数显著降低(P <0.05)；血清TC、LDL-C、Hcy、ALT显著降低(P <0.05，P <0.01)，HDL-C、SOD活性、apoA-1表达量均有非常显著升高(P <0.01)。可见明显的肝细胞胆固醇外流和肝脏保护作用。本课题通过研究确认了oxLig-1作为上调内源性ABCA1和apoA-1基因和蛋白表达以及信号通路活性配体的作用机理，探讨了其以巨噬细胞或“脂肪泡沫细胞”作为干预治疗高脂血症动脉粥样硬化的一个靶点，加速胆固醇RCT速率的分子机制，对于动脉粥样硬化防治提供了新的理论和实验依据，具有重要的科学意义和价值。