CD36新型脂质配体介导的胆固醇代谢紊乱及干预机理研究

Scavenger receptor CD36 recognition of oxLDL, activation of MAP kinase induced foam cell formation is a key link in pathological events of atherosclerosis. Mediated oxLDL and CD36 combined with the lipid-ligand is essential. Recently, we demonstrated and reported by immunoprecipitation assay that oxLig-1, a lipid moiety of oxLDL, leads to activation and recruitment of Src kinase Fyn, Lyn and caveolin-1 to CD36 intracellular C-terminal. The mitogen-activated protein (MAP) kinases c-Jun N-terminal kinase 2 (JNK2) and extracelluar signal-regulated protein kinase 1 and 2 (ERK1/2) were specifically phosphorylated in macrophages exposed to oxLig-1.It shows the same pathways of foam cell formation of CD36. The structural of mediated CD36 and oxLig-1 combination may be ω-COOH in oxLig-1.It has been Suggesting that the important scientific significance oxLig-1 as a new target for inhibition oxLDL combined with CD36. This project intends to use two-way method of CD36 gene siRNA and ω-COOH methylation of oxLig-1. It will been study the mechanism of the oxLig-1-mediated oxLDL and CD36 combination. It will been also explore the disorde of cholesterol metabolismr in form cell of atherosclerosis. Finaly, it will been Investigate the biological protective effect of the recombinant protein-rβ2-GPIDV specific binding oxLig-1.

清道夫受体CD36识别内吞oxLDL，活化MAP激酶致泡沫细胞形成是动脉粥样硬化（AS）发生的关键环节和重要病理事件，其中介导oxLDL与CD36结合的脂相配体至关重要。我们新发现并报道了来源于oxLDL胆固醇亚油酸的新脂类配体oxLig-1可作用于CD36，招募CD36胞内C端蛋白激酶Fyn、Lyn、Caveolin-1磷酸化，活化MAP激酶ERK1/2和JNK1/2，表现了与oxLD相同的致泡沫细胞形成通路，其结合CD36的结构基础可能是oxLig-1的ω-COOH，提示oxLig-1作为干预oxLDL新靶点的重要科学意义。本课题拟运用CD36基因 siRNA和oxLig-1的ω-COOH甲基化双向缺陷方法，探讨oxLig-1 介导oxLDL与CD36脂相结合关系以及所引发的AS泡沫细胞胆固醇失稳态形成机理；探讨重组蛋白rβ2-GPIDV特异性结合oxLig-1所形成的生物学保护作用。

项目背景：清道夫受体CD36识别结合并吞噬oxLDL，活化MAP蛋白激酶并最终导致泡沫细胞形成是动脉粥样硬化（AS）发生的重要病理事件和关键环节，其中介导oxLDL与CD36结合的脂相配体至关重要。.研究内容：本课题运用鼠源巨噬细胞建立稳转CD36基因 siRNA细胞株以及新型脂相配体7-KC-9-COOH的ω-COOH甲基化双向方法，研究源于oxLDL胆固醇亚油酸的新脂类物质7-KC-9-COOH 介导oxLDL与CD36的脂相结合关系以及所引发的的AS泡沫细胞胆固醇失稳态形成机理；探讨重组蛋白rβ2-GPIDV特异性结合7-KC-9-COOH所形成的生物学保护作用。.重要结果：分子对接模拟计算显示脂相配体7-KC-9-COOH的羧基端以结合能量最低（-10.89kj/mol）预示为结合活性中心；SPR分子动力学实验同样证实7-KC-9-COOH能够与CD36特异性结合，结合的Kd值为44.7umol/mL；ELISA实验进一步证实验证了分子对接结果，脂相配体7-KC-9-COOH的ω-COOH甲基化合物及单独的柔性尾和疏水核心部分均不能与CD36结合，分子水平证实了新脂类物质7-KC-9-COOH 介导oxLDL与CD36的脂相结合关系。在细胞水平上7-KC-9-COOH能够明显启动CD36招募Src蛋白激酶Fyn及Lyn，浓度及时间依赖性的上调caveolin-1的表达，而当羧基端被甲基化封闭后这种作用被明显抑制，证明7-KC-9-COOH特异性结合CD36启动了CD36下游的信号通路。利用稳定的沉默效率为90%以上的CD36基因沉默巨噬细胞株发现新脂类物质7-KC-9-COOH介导oxLDL结合CD36明显减弱，并且发现7-KC-9-COOH介导的CD36调控的下游脂筏caveolin-1吞噬oxLDL明显减少。稳转siRNA细胞株以及ω-COOH甲基化双向方法都证实了源于oxLDL胆固醇亚油酸的新脂类物质7-KC-9-COOH 介导oxLDL与CD36的脂相结合关系以及所引发的的动脉粥样硬化AS泡沫细胞胆固醇失稳态形成机理。在此基础上发现重组蛋白rβ2-GPIDV通过特异性结合7-KC-9-COOH，抑制oxLDL-CD36结合，形成生物学保护作用。.科学意义：介导oxLDL与CD36结合的脂相配体7-KC-9-COOH提示作为干预oxLDL与CD36作用