两种与BRS-3相互作用新蛋白在支气管上皮细胞应激信号转导中的作用

为了探讨BRS-3信号相关分子在支气管上皮细胞（BEC）应激信号转导中的超分子组装图谱及功能意义,本项目拟对在前一项目中发现的与BRS-3相互作用的2种新基因蛋白的超分子组装在应激信号传递中的定位和作用进行研究。项目首先通过构建荧光表达载体,进行亚细胞定位；通过制备抗体,设计探针,应用免疫组化和原位杂交，观察两种新基因及编码蛋白在臭氧应激诱导的气道高反应动物模型（应激0，2，4，8天）中的时空分布。然后收集应激不同时间的BEC，应用免疫共沉淀技术检测两种新基因编码蛋白与BRS-3的相互作用；并用互补的荧光片断标记两个相互作用蛋白，观察相互作用发生的时间、位置、强弱、所形成蛋白复合物的稳定性，以及细胞信号分子对其相互作用的影响等；免疫共沉淀、质谱分析和多重荧光技术证实超分子组装成分和空间定位。针对超分子组装应用反向酵母三杂交筛选干扰小分子肽,观察对细胞应激功能的影响。