TNFSF13基因作为喉癌诊断和预后分子标志物的应用基础研究

喉癌是常见头颈部恶性肿瘤，早期诊断与早期治疗，不仅可以保留器官功能，也可以提高治愈率，在临床上愈来愈受到重视。在分子水平寻找能够预测喉癌发生、发展和预后的指标，对提高临床诊疗效果、延长患者生存期具有重要意义。本课题旨在探讨TNFSF13基因在喉癌的发生发展中的分子生物学机制，以及其作为预测喉癌发生与恶性程度的分子标志物的可能性。采用RNAi慢病毒技术抑制喉癌细胞中TNFSF13基因表达，观察相关恶性表型的变化情况，揭示TNFSF13参与喉癌细胞增殖与转移的作用机制，同时通过检测TNFSF13在不同临床分期的原发喉癌手术标本中的表达水平，利用其可溶性蛋白特性对患者进行血清学筛查，结合临床病理资料，分析TNFSF13与喉癌发生、发展的相关性，从而为喉癌早期诊断和治疗探索新的标志物。

目的：研究喉鳞状细胞癌组织中肿瘤坏死因子超家族13（TNFSF13）的表达水平,以及其与蛋白增殖细胞核抗原ki-67、NF-κB p65的相互作用。同时探索血清学检测TNFSF13在喉癌诊断中的意义。.方法：用免疫组化法检测198例喉癌以及38例声带息肉组织中TNFSF13、ki-67、NF-κB p65的表达。Elisa法检测喉癌患者及健康志愿者血清中TNFSF13的表达量。用qRT-PCR来测量TNFSF13 mRNA在喉癌、癌旁组织及声带息肉中的表达量。设计与筛选沉默TNFSF13基因靶序列构建慢病毒载体转染喉癌Hep-2细胞，MTT实验、BrdU实验检测喉癌细胞增殖能力的改变。.结果：1.喉癌与声带息肉组织中TNFSF13表达率分别为83.3%、57.9%，差异明显(χ2 = 12.540, p = 0.001)。ki-67和NF-κB p65在喉癌中表达率为63.1%、80.8%，在声带息肉组织中表达率为28.9%、44.7%，差异有统计学意义(χ2 =15.257, p = 0.000; χ2=22.124, p = 0.000)。2.TNFSF13与在不同T分期、不同分化程度喉癌中表达无统计学差异(p=0.352、0.454)；与颈淋巴结转移、远处转移无关（p=0.576、0.424）。3.TNFSF13表达与ki-67(r=0.207,p=0.003)、NF-κB p65(r=0.435,p=0.000)表达具正相关性。4.经单因素方差分析，喉癌、声带白斑、声带息肉及健康成人血清中TNFSF13表达量差异有统计学意义。5.Kaplan-Meier生存分析，TNFSF13高表达组和低表达组喉癌患者三年生存差异有统计学意义，Cox比例风险回归模型分析得知TNFSF13、 ki-67、NF-κB p65的表达量，喉癌的分化程度(β=1.535,p=0.000)、患者的年龄(β=2.029,p=0.000）、是否复发(β=1.919,p=0.030)均为影响患者生存的危险因素。6. 经qRT-PCR测量， 喉癌TNFSF13 mRNA的表达量比在声带息肉及癌旁组织高。7.MTT实验和Brdu实验显示TNFSF13基因沉默后细胞增殖能力显著降低。.结论：TNFSF13与喉癌的发生及预后有关，可作为喉癌诊断及预后的分子标记物。