MicroRNA及其作用靶点多态与肝癌发病风险及预后的研究

肝癌是全世界最高发的恶性肿瘤之一，全世界半数以上的肝癌病人集中在中国。因为尚缺乏有效的临床和分子诊断标记，肝癌很难早期发现，而且预后非常差。因此，迫切需要鉴定出肝癌患病风险及预后相关的遗传位点。研究表明，microRNA及其作用靶点的遗传变异影响癌症的发生和预后。本项目将利用生物信息学方法筛选出所有位于microRNA中以及肝癌相关基因3′UTRs可能的microRNA结合区域内的多态位点；通过两步病例-对照研究在大规模肝癌与正常对照人群中对筛选的多态位点进行基因分型及统计分析，找出等位基因频率分布在病例组和对照组存在显著差异的多态位点以及与肝癌病人生存期显著相关的多态位点；最后通过生物信息学方法预测、双荧光素酶报告基因实验以及实时定量 PCR检测基因表达水平等实验对多态位点的作用进行验证及功能分析，以期了解候选基因位点在肝癌发病风险及预后中的分子作用机制以及为肝癌的诊断及治疗奠定基础。

本项目的主要目的是鉴定出位于microRNA 及其作用靶点区域中与肝癌患病风险以及预后相关的遗传位点。我们基本上按照原计划所拟定的研究方案进行，同时充分利用本研究团队开展的肝癌GWAS课题所积累的丰富资源，最终顺利完成了本研究项目，取得了可喜的研究成果。.我们首先跟踪查阅了国际上关于MicroRNA相关SNP与癌症发病风险相关性的研究进展，并且针对其中5个研究最为广泛的MicroRNA相关SNP进行了meta分析，获得最新的研究背景，也借鉴了别人的研究经验。相关的研究结果于2013年发表在Plos One杂志，本项目负责人为通讯作者。.在本项目开展之初，本课题组开展的肝癌GWAS研究圆满完成，相关研究成果于2013年发表在Nature Genetics 杂志，本项目负责人为第一作者。该肝癌GWAS研究课题的完成，为本项目奠定了非常坚实的基础，包括积累了大量的基因分型数据和研究样本。我们通过与microRNA的相关数据库进行比对分析，发现在肝癌GWAS分析的SNP位点中，有556个位于人类MicroRNA序列，有90357个位于人类MicroRNA作用靶点区域内。.我们通过两阶段、五个独立人群样本、超过4000对肝癌和对照样本的分析，从以上9万多个候选SNP位点中，成功筛选到位于SLC7A6基因3’UTR区域hsa-miR-548d-3p靶点中的rs11350为肝癌易感基因位点（加性模型：P＝2.09E-07；显性模型：P＝1.82E-07）。并通过通过生物信息学方法预测、双荧光素酶报告基因实验以及实时定量 PCR 检测基因在肝癌及癌旁组织中的表达水平等实验，揭示了rs11350¬－C等位基因能够影响miR-548d-3p对SLC7A6基因表达的有效抑制，相应地增加了rs11350－C等位基因所对应的SLC7A6基因在肝脏组织中的表达水平。.我们在362例肝癌手术样本中，对53个位于MicroRNA成熟序列中的SNP位点，分析其与肝癌预后的关系。成功鉴定了miR-608 rs4919510为肝癌预后相关的遗传多态位点。我们发现rs4919510与肝癌病人的生存期显著关联，不论是单因素分析（P＝0.013），还是多因素分析（P＝0.021）。.这一项目的顺利完成及其产生的研究成果，为揭示肝癌发生发展的分子机制提供了新的线索，也为肝癌的预警、预后提供了新的分子标志物。