CFB基因多态与慢性乙肝风险关联的分子机制及其在预测乙肝疗效中的应用

Chronic hepatitis B (CHB) is one of the most important health problems of the people in China, which has more than 30 million CHB patients. Recently, we conducted a genome-wide association study (GWAS) to search for risk loci of CHB. We found that a functional genetic variant rs12614 (R32W) in the coding region of CFB gene was significantly associated with the risk of CHB (Hepatology 2015, 62:118-28). This project is proposed to investigate the mechanism of this association and the clinical utility of this genetic variant: 1) Perform a functional prediction of rs12614 using bioinformatic analysis to assess if it has impact on the function of CFB. 2) Perform a series of molecular, cell and animal experiments to clarify the real impact of rs12614 on the function of CFB itself and the alternative pathway of complement system which CFB is involved, and reveal its molecular mechanism resulting in increased risk of CHB; 3) Perform an association analysis of rs12614 with treatment response in more than 1000 CHB patients who received interferon only or combined with nucleos(t)ide analogues. If successfully implemented, this study has the potential to significantly improve the understanding of the role of CFB gene in the development of CHB, and explore its application in personalized therapy of CHB.

慢性乙肝是人们健康的重大威胁，我国有高达3000多万的慢性乙肝病人。我们最近开展的一项旨在全基因组范围内搜索与慢性乙肝风险相关的基因位点的研究，发现CFB基因编码区的功能多态位点——rs12614（R32W）与慢性乙肝风险显著关联（Hepatology 2015, 62:118-28）。本项目拟探讨该关联存在的可能分子机制以及该多态位点潜在的临床应用价值：1）通过生物信息学方法，预测rs12614对CFB功能的潜在影响；2）通过一系列分子、细胞和动物学实验，阐明rs12614对CFB自身的功能以及CFB所在的补体系统旁路途径的真正影响，并揭示其导致慢性乙肝风险增加的分子机制；3）通过在1000例以上的慢性乙肝病人中，分析rs12614与干扰素以及核苷类药物治疗慢性乙肝病人的疗效之间的关系。本研究将有助于深入理解CFB基因多态在慢性乙肝感染过程中的作用，并探索其在慢性乙肝个性化治疗中的应用。

我国是乙肝大国，目前有高达3000多万的慢性乙型肝炎（慢性乙肝）病人。本项目主要针对我们前期通过全基因组关联研究鉴定的一个慢性乙肝风险相关基因位点——CFB基因编码区的rs12614（R32W）（Hepatology 2015）开展深入研究。一方面揭示其导致慢性乙肝风险增加的分子机制；另一方面探索其在慢性乙肝个性化治疗中的应用。.首先，我们开展了CFB_rs12614对CFB功能影响的生物信息学分析，通过应用SIFT和PolyPhen2等多个软件对rs12614的潜在功能影响进行评估，结果显示rs12614能显著影响CFB的功能。.其次，我们在278例正常人和248例慢性乙肝病人中，分析了CFB_rs12614基因型与血浆CFB蛋白水平之间的关系，在两组样本中均发现携带有慢性乙肝风险基因型CFB_rs12614_CC的个体，其CFB的浓度要显著低于携带CFB_rs12614_CT或TT的个体。.再次，我们在体外细胞实验中，发现CFB具有抗HBV的活性，而且相比于慢性乙肝风险性等位基因型的CFB32R基因，慢性乙肝保护性等位基因型的CFB32W基因可显著提高表达与分泌的CFB水平。.最后，我们在四组独立的总数接近2000例的经抗HBV药物治疗的慢性乙肝队列病例中，分析了CFB_rs12614与慢性乙肝病人药物治疗反应之间的关系，发现在两组用长效干扰素治疗的慢性乙肝队列中，相比于携带CFB_rs12614_TT/CT基因型的慢乙肝病人，携带CFB_rs12614_CC基因型的慢乙肝病人始终具有更高的HBeAg血清学转换率、更多的HBV DNA下降和更高的综合应答率，但是在两组用核苷（酸）类似物治疗的慢性乙肝患者中，CFB_rs12614基因型与慢性乙肝疗效无关。.本项目所产生的研究结果写成的两篇主要论文已分别发表在国际药学和胃肠肝病学领域的著名期刊《Aliment. Pharmacol. Ther.》和《Clin. Gastroenterol. Hepatol.》；还有一篇研究论文也已经投稿《J. Hepatol.》杂志并被送出评审。此外，我们还基于CFB_rs12614在乙肝个性化治疗中的作用申请了一个国家发明专利。.这一项目的顺利完成及其产生的研究成果，为深入理解乙肝慢性化发生发展的分子机制提供了新的线索，并为慢性乙肝的个性化治疗提供了新的分子标记。