宁夏地区奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌生物被膜形成能力及其与耐药性的相关性研究

The resistance increased significantly after the bacterial biofilm was formatted, and it caused the difficulty in the treatment of diseases. The studies on bacterial biofilm are getting increasing concern by researchers, but the mechanism of its relationship with antibiotic resistance is not fully clear. In this study, we aim to investigate biofilm forming capacity and its relationship with antibiotic resistance of staphylococcus aureus isolated from mastitis in Ningxia by applying the method of bioinformatics and molecular biology. Using microbiology and confocal laser scanning microscopy techniques, biofilm forming capacity were studied and analyzed the relationship with resistance capacity. Through the PFGE analysis and MLST and spa type, genome background of staphylococcus aureus would be analyzed. The aim is to explore the influence of genome background on biofilm genotypes in staphylococcus aureus evolution. By detecting plasmid profiles, CRISPR, integron - gene cassette and efflux pump msrA, the relationship of biofilm with resistance in staphylococcus aureus is going to be explored preliminarily. This study will provide theoretical foundation in guiding clinical medication and new drug development. And it is also great significance for effectively preventing and curing the infections caused by staphylococcus aureus.

细菌形成生物被膜后耐药性明显增加，并且导致疾病的治疗困难，关于生物被膜的研究已引起国内外学者的关注，但其与耐药性的相关性机制尚未完全清楚。本研究拟应用生物信息学和分子生物学技术，研究宁夏地区奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌生物被膜形成能力及其与耐药性的相关性研究：采用微生物学和共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)方法对金葡菌生物被膜的形成能力进行研究，并分析其与耐药能力的相关性；通过脉冲场凝胶电泳（PFGE）、多位点序列分型（MLST）和表面蛋白 A 基因多态性分型（spa），进行金葡菌基因组背景解析，以探究金葡菌进化过程中其基因组背景对生物被膜基因型的影响规律；通过分别对浮游菌和生物被膜菌进行质粒图谱、整合子-基因盒、CRISPR系统以及外排泵msrA的研究，初步探究金葡菌生物被膜与耐药性的相关性机制。本研究将为指导临床用药和新药研发提供理论支持，并对有效防治金葡菌感染性疾病具有重要意义。

细菌形成生物被膜后耐药性明显增加，并且导致疾病治疗困难，关于生物被膜的研究已引起国内外学者的关注，但其与耐药性的相关性机制尚未完全清楚。本研究采用微量半定量方法测定生物被膜形成能力，光学显微镜、扫描电镜和共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)方法对金葡菌生物被膜的形成能力进行研究，并分析其与耐药能力的相关性；采用肉汤稀释法测定牛源金黄色葡萄球菌对15种药物的敏感性，PCR方法检测分离株生物被膜相关基因的携带情况；通过MLST、spa、RAPD与agr分型，进行金葡菌基因组背景解析；通过分别对浮游菌和生物被膜菌进行整合子、CRISPR系统以及外排泵mepA的研究，初步探究金葡菌生物被膜与耐药性的相关性机制。结果显示，金黄色葡萄球菌生物被膜形成能力较强；随着培养时间的延长，生物被膜结构越来越紧密。金黄色葡萄球菌在生物被膜状态下的MIC值比浮游状态下的MIC值增加4-1024倍。金葡菌BF阴性菌株的icaA、icaD、atlE、bap、fnbpB、SaG基因的检出率均低于BF阳性金葡菌；强粘附性金葡菌cna基因检出率低于BF阴性菌株、弱粘附性及中等粘附性菌株。所有受试菌株被分成11种ST型（以ST50为主，其次为ST4053）；20种spa型（以t224型为主，其次为t518）；6种RAPD型（以Ⅳ型为主，其次为Ⅲ型）；agr分型以Ⅰ型为主，其次为Ⅱ型；谱型ST50-t224-RAPD Ⅳ-agrⅠ为主要流行菌株。菌株中CRISPR 系统的存在与金葡菌对抗菌药物的耐药性降低有关。浮游菌中mepA的表达可使细菌产生抗性，但在生物被膜内特殊环境中膜内菌对抗生素耐药性的增加与外排泵基因的上调相关性不显著。本研究为指导临床用药和新药研发提供理论依据，并对有效防治金葡菌感染性疾病具有重要意义。