去泛素化酶USP25 调节母-胎界面树突状细胞Toll 样受体介导母-胎免疫耐受的机制研究

Immune abnormality is important reason in maternal-fetal immune imbalance. Our previous study proves that Toll receptor involves in development of maternal-fetal immune imbalance, but the role of toll like receptor is unclear. We recently proved that deubiquitinating enzyme USP25 is the key regulator protein of toll like receptor transcriptional factor. We want to reveale the inner mechanism by co-immunoprepitation, gel electrophoresis, target gene implication both in-vivo and in-vitro level targeted at USP25/TRAF3 by shRNA interruption. We hope to explore role of USP25,TRAF3 and USP25/TRAF3 in regulating regulating Toll mediated maternal-fetal immune tolerance. Hoping we can enrich and develop maternal-fetal recognition theory and provide new insight into treatment and diagnosis of pregnancy related disease.

免疫学异常是导致母-胎免疫耐受失衡的重要原因。本课题组前期工作已证实Toll 样受体参与了母-胎免疫耐受失衡的发生，但对于该过程母-胎界面树突状细胞Toll 样受体如何调节的机制尚不明确。本课题组最新研究证实去泛素化酶USP25是调控Toll 样受体转录因子的重要蛋白。申请者拟采用染色质免疫共沉淀技术、凝胶电泳漂移、靶基因验证等技术，利用体内动物模型及体外模型，并以USP25/TRAF3为靶点，构建shRNA慢病毒载体，探讨从不同层面阻断及过表达USP25、TRAF3、USP25/TRAF3对调节母-胎界面树突状细胞Toll 样受体分化参与妊娠母-胎耐受的机制。揭示这些蛋白与母-胎免疫识别和耐受的关系，阐明USP25与TRAF3相互作用的模式，解析这些蛋白所参与的信息转导通路中上、下游关键基因的相互关系，丰富和发展母-胎免疫识别和免疫豁免理论，为提高妊娠相关疾病预防和诊治水平提供科学依据。

免疫学异常是导致母-胎免疫耐受失衡的重要原因。本项目原计划是在近年本课题组前期研究工作的基础上针对妊娠母-胎免疫耐受机理进行研究，本项目研究在操作的起始阶段由于缺乏树突状细胞的细胞系，体外分离原代技术难度较大（稳定性差），且树突状细胞在细胞功能上与巨噬细胞与许多相似性，所以我们根据实际情况对实验进展进行了调整，将研究对象改为巨噬细胞。对研究计划作了细微调整，但内容与目的基本保持一致。此外，根据实验室进展和国内外免疫学发展趋势，我们也及时调整战略，扩大扩深与母胎免疫耐受相关的研究，研究内容围绕着“USP25”与“巨噬细胞极化”，采用染色质免疫共沉淀技术、凝胶电泳漂移、靶基因验证等技术，利用体内动物模型及体外模型，并以USP25为靶点，构建shRNA慢病毒载体，探讨从不同层面阻断及过表达USP25对调节母-胎界面巨噬细胞极化参与妊娠母-胎耐受的机制。通过本研究我们达到了以下目标: .①阐述去泛素化酶USP25调节母-胎界面巨噬细胞介导母-胎免疫耐受的的机理。 .②明确母胎界面巨噬细胞与滋养细胞的交互作用，以及其参与复发性流产的机制。 .③寻找到了USP25上游microRNA（miR-27a-3p），发现miR-27a-3p/USP25轴通过抑制滋养细胞迁移和侵袭参与复发性流产的发病机制。.④明确了IL-6通过激活Stat3介导的M2巨噬细胞极化作为正常妊娠的重要因素。.⑤初步证实M1巨噬细胞的细胞外囊泡通过靶向TRAF6在复发性自然流产中传递miR-146a-5p和miR-146b-5p以抑制滋养层迁移和侵袭，参与复发性流产的发生。.⑥结合临床工作，进一步明确巨噬细胞功能等免疫因素与妊娠结局的相关性。