大黄、赤芍调控 JAK/STAT 信号通路促进肝细胞再生的机制研究

The symptoms of AHF（acute hepatic failure ）is onset urgent,with treatment difficult and high mortality.All this time,GuangXi is considered to be a high incidence area of viral hepatitis,since the morbidity of acute liver failure is above the national average .Liver cell regeneration creates very important value and application prospect in ALF research field.Many studies shows that JAK/STAT signal pathway could be a critical mechanism has effects at liver cell regeneration,Rhubarb and Red peony root play very important role in acute liver failure treatment,The development of molecular biological technique provides supporting in the further definite of liver cell regeneration functional gene and specific regulation.This project intends to indicate the relation of characteristics change of JAK/STAT signal pathway,and Rhubarb,Rred peony root would or would not progresses liver cell regeneration process,associated with DNA microarray,western blot,RT-PCR,and so on,as well as making theoretical and technical support at ALF treatment.

急性肝衰竭发病急、死亡率高，救治难度大。一直以来，广西都是病毒性肝炎的高发区，肝衰竭的发病率明显高于全国平均水平。肝细胞再生是肝衰竭研究领域里具有重要价值和应用前景的研究方向。有研究表明JAK/STAT 信号通路可能是影响肝细胞再生的重要机制，大黄、赤芍是治疗肝衰竭的要药，其在肝衰竭治疗中起着非常重要的作用，分子生物学技术的发展为进一步明确肝细胞再生功能基因及特异性调控提供了有力的研究保障。本项目拟利用基因芯片、western blot、RT-PCR 等技术研究 JAK/STAT 信号通路在肝细胞再生中的传导途径，阐明肝衰竭肝细胞再生过程中 JAK/STAT 信号通路变化特点，及大黄赤芍是否通过调节该通路来发挥促进肝细胞再生的作用机制，为治疗肝衰竭提供重要的理论和技术支持。

目的：建立急性肝衰竭大鼠动物模型，探讨大黄赤芍注射液干预调控 JAK/STAT 信号表达、促进肝细胞再生的机制，为治疗高黄疸的中药要药大黄、赤芍应用于肝衰竭的临床服务。.方法：采用60%比例的肝脏组织切除+（D-Gal+LPS腹腔注射）构建最合适急性肝衰竭大鼠模型。SPF级SD大鼠120只，随机分成6组：大黄赤芍注射液低剂量组20只，大黄赤芍注射液中剂量组20只，大黄赤芍注射液高剂量组20只，造模阳性对照组（模型对照组）20只，促肝细胞生长素组20只，假手术组20只。除假手术组外，均进行60%肝脏切除+（D-Gal+LPS腹腔注射），并给予并予以对应的药物干预。造模后24h、48h两个时间点每组各取6只大鼠，获取血液和组织样本。检测各组大鼠血清的ALT、AST、TBIL水平；采用基因芯片技术筛选JAK/STAT信号通路中表达差异的相关蛋白及细胞因子基因，然后设计引物，采用qPCR、Western Blot技术验证不同组间的相关基因及蛋白是否存在表达差异；采用免疫组化技术检测各组大鼠PCNA指数和JAK/STAT信号通路蛋白的来源及迁移趋势；采用流式细胞技术检测各组大鼠的肝细胞增殖指数；采用HE染色技术检测各组大鼠肝细胞的有丝分裂指数以及各组的肝脏病理情况。.结果：.（1）大鼠存活率及病理结果提示60%肝切除比例+（D-Gal+LPS腹腔注射）最符合模型要求，确定构建大鼠急性肝衰竭模型。 .（2）造模后24h、48h各组大鼠血清ALT、AST、TBIL水平检测结果：24h、48h药物干预组均明显低于造模阳性对照组（P <0.05）,三个不同剂量大黄赤芍组之间的趋势是从高剂量组到低剂量组ALT、AST、TBIL水平呈现从高到低，且低剂量组相比高剂量组均有统计学差异（P < 0.05），48h的水平相比24h均有下降。. （3） 有丝分裂指数结果（MI）结果：造模后24h药物干预组均明显高于造模阳性对照组，且低剂量组明显高于中、高剂量组（P < 0.05）；造模后48h除高剂量组外其他组均明显高于造模阳性对照组，且低剂量组明显高于中、高剂量组（P < 0.05）。. （4） 增殖指数（PI）结果：造模后24h检测显示各药物干预组的PI指数高于造模阳性对照组，三个中药干预组中低剂量组PI指数高于中、高剂量组（P < 0.05）。48h相比24h各组的PI指数均有一定提高，