金银花活性成分对铜绿假单胞菌生物膜形成的影响及其机制的研究

铜绿假单胞菌（P.a）是引起肺部感染的重要条件致病菌，被生物膜表型P.a感染的患者往往难以治愈。我课题组研究证明,金银花水煎液能干预P.a生物膜形成。绿原酸、异绿原酸、木犀草素是金银花的主要活性成分，因此本项目首先筛选干预P.a生物膜形成的金银花活性成分，再采用PF-2D目标蛋白快速分离系统、飞行质谱等蛋白质组学技术对各组上清液和菌体蛋白进行比较，明确各组间的差异蛋白，发现药物作用靶点；然后采用比色法测定藻酸盐含量，RT-PCR、PCR等方法研究各组藻酸盐合成基因algD、algU及其调控基因mucA的变化；最后运用HPLC和绿色荧光检测法测定、观察各组密度感应(QS)系统的信号传导分子AHL的功能状态，并检测P.a释放的外毒素A、LPS、绿脓菌素、弹性蛋白酶和蛋白水解酶的活性，了解金银花活性成分对QS系统的影响。从而在分子、基因和蛋白质水平上探讨金银花活性成分干预P.a生物膜形成的机制。