金黄色葡萄球菌肠毒素B的B细胞免疫优势表位的鉴定及免疫保护机制研究

Methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) show multiple drug-resistant,serious clinical infection and damage, but at present there is no effective MRSA vaccine that has been successfully developed. Staphylococcal enterotoxin B (SEB) is a major virulence factor of MRSA, and its recombinant mutant can induce effective immune protection.Therefore,it is an important candidate antigen of MRSA vaccine.Our previous study showed that:antibody dependent protective immune effects of SEB show significant difference when assisted with different adjuvants. Effects assisted with Freund's adjuvant adjuvant is better than that with CFA aluminum salt adjuvants.The specific molecular basis and mechanism of the protective response is still not clear. Therefore,this project aims to screen and identify the B cell immunodominant epitopes of SEB by the technology of immunodominant antibody response analysis,and to clarify the immune protective effect and response mechanism of SEB by in vivo and in vitro experiments,then finally put forward a new explanation of the different antibody dependent protective effects of antigen when assisted with different adjuvants,and therefore provide candidate molecule and the theory basis to optimize MRSA vaccine design strategy based on the SEB antigen.

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）呈现多重广泛耐药，临床感染危害严重，但目前尚未成功研制的有效MRSA疫苗。肠毒素Ｂ（SEB）是MRSA的主要毒力因子，其重组突变体可诱导有效的免疫保护，是MRSA疫苗的重要候选抗原。我们前期实验发现：SEB的抗体依赖的免疫保护作用在不同佐剂辅助下存在差异，弗氏佐剂辅助下的免疫保护效果优于铝盐佐剂，该保护性应答的具体分子基础和作用机制尚不明确。因此，本项目拟用抗体免疫优势应答分析技术，对SEB抗原中免疫优势应答的Ｂ细胞表位进行筛选与鉴定，并通过体内外实验阐明其免疫保护作用和应答机制，对不同佐剂辅助下抗体依赖的抗原免疫保护效果差异提出新的解释，为基于SEB抗原的MRSA疫苗设计策略的优化提供候选分子和理论依据。

本课题全面筛选了金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)的B细胞免疫优势表位，并对其表位的免疫保护机制进行了研究。基于合成重叠肽的ELISA方法，从SEB抗原中筛选鉴定出6个线性B细胞免疫优势表位：SEB31-48、SEB97-114、SEB133-150、SEB193-210、SEB205-222和SEB247-261(氨基酸残基31-48, 97-114, 133-150, 193-210, 205-222, and 247-261)，其中，SEB31-48, SEB133-150 、 SEB193-210、SEB205-222为四个新发现表位。用优势表位-KLH蛋白免疫小鼠，发现这6个优势表位均有效激发了抗MRSA感染的保护性抗体应答，经抗体亚型分析可知，表位特异性抗体以IgG1亚型为主，其次为IgG2b。进一步，用基因工程方法将6个单肽串联，制备了SEB多表位疫苗。在小鼠模型中，SEB多表位疫苗引起了IgG1为主的SEB特异性应答，应答倾向于Th2型，该多表位抗血清发挥了补体依赖的协同调理吞噬作用。相对于SEB全抗原疫苗，SEB多表位蛋白疫苗能更有效减少小鼠各脏器细菌的定植量。并且，SEB多表位疫苗对分泌SEB的不同近源性的多种临床MRSA菌株有交叉保护效果。本研究为SEB的 B细胞多表位疫苗的人体实验奠定了基础。