Sirt3介导线粒体自噬在原发性胆汁性胆管炎免疫损伤中的作用及机制研究

Mitochondrial antigen exposure and T cell over-activation in bile duct epithelial cells (BEC) are two key links in the pathogenesis of primary biliary cholangitis (PBC). Mitochondrial damage plays an important role in the above process, but the mechanism is unclear. Studies have shown that mitophagy is an important way to clear damaged mitochondria, and its dysfunction plays an important role in antigen exposure, inflammatory response and the initiation of autoimmunity. We found that: the activation of mitochondrial autophagy was blocked in PBC patients, and mitophagy disorders significantly promote antigen exposure and T cell activation. In addition, Sirt3 is an important molecule that regulates mitophagy. We found that Sirt3 agonists can significantly increase mitophagy and improve the symptoms of disease in model mice, suggesting that Sirt3-mediated mitophagy is important in the pathogenesis of PBC. However, the specific mechanism of Sirt3 regulating PBC mitphagy is unclear, and the mechanism of mitophagy regulation of antigen exposure and T cell activation is not clear. This project intends to explore the role of Sirt3-mediated mitophagy in the pathogenesis of PBC and its molecular regulation in clinical samples, animal models. The expected results will improve the pathogenesis of PBC and provide a therapeutic target.

胆管上皮细胞（BEC）线粒体抗原暴露和T细胞的过度活化是原发性胆汁性胆管炎（PBC）发病的两个关键环节，线粒体受损是以上环节的重要启动因素，但机制不清。研究表明，线粒体自噬是清除受损线粒体的重要途径，其功能障碍对抗原暴露、炎症反应及启动自身免疫具有重要作用。我们发现：PBC患者BEC线粒体自噬存在障碍，且自噬障碍显著促进其抗原暴露及T细胞活化。此外，Sirt3是调控线粒体自噬的重要分子，我们在动物模型中发现，Sirt3激动剂可以显著提高线粒体自噬水平并改善模型鼠疾病症状，提示Sirt3介导线粒体自噬在PBC发病中具有重要作用，但Sirt3调控PBC线粒体自噬的具体机制不清，且线粒体自噬调控抗原暴露、T细胞活化的机制也不明确。本项目拟在临床样本、动物模型及细胞水平，深入探讨Sirt3介导的线粒体自噬在PBC发病中的作用及分子调控机制，预期结果将为PBC发病机制提供有益补充并为治疗提供靶点。

胆管上皮细胞线粒体抗原暴露和T细胞的过度活化是原发性胆汁性胆管炎（PBC）发病的关键环节。研究表明，自噬是清除受损线粒体的重要途径，其功能障碍对抗原暴露、炎症反应及启动自身免疫具有重要作用。我们发现：PBC患者胆管上皮细胞及肝细胞晚期自噬体增多，且自噬障碍显著促进其抗原暴露及T细胞活化。肝组织活检标本中自噬增多的PBC患者组ALT、AST、TBIL、ALP、GGT、IgM水平高于无自噬组；TP、ALB、IgG水平低于无自噬组(P＜0.05)；而自噬与熊去氧胆酸（UDCA）应答呈正相关；晚期PBC组自噬发生率高于早期PBC组（P＜0.05），自噬组PBC早期应答率高于不应答率，晚期应答率低于不应答率（P＜0.05）。自噬组治疗前后ALT、AST、TBIL、ALP、GGT下降程度和TP、ALB上升程度均大于非自噬组。PBC患者外周血免疫细胞亚群具有一定特征性：外周血CD4+T细胞分布与健康对照者无明显差异，naïve CD4+T细胞比例降低(P＜0.05)，CD4+T细胞分泌IFN-γ、IL-4和IL-17增多(P＜0.05)；先天淋巴细胞亚群1型和3型（ILC1，ILC3）比例降低(P＜0.05)，且随病程进展，降低趋势明显，但尚未发现统计学显著意义(P>0.05)。Sirt3是调控线粒体自噬的重要分子。细胞水平初步研究提示Sirt3激动剂可以显著提高线粒体自噬水平并改善模型鼠胆汁淤积水平(P＜0.05)。白蛋白辛炔酸（BSA-2OA）诱导的胆汁淤积小鼠肝脏CD4+、CD8+ T细胞增高，Th1、Th17比例增高。在胆管结扎急性胆汁淤积模型中，Sirt3表达降低，且肝胆管上皮细胞胆汁酸转运相关蛋白表达亦呈相应变化。本项目初步探讨了自噬在PBC发病中的作用机制，初步结果可能是PBC发病机制的有益补充，并为治疗提供靶点。