小麦胚乳14-3-3蛋白通过与淀粉合成酶形成蛋白互作复合体调控籽粒淀粉的合成

14-3-3蛋白对多种生理过程有重要的调节作用。淀粉是影响小麦产量和加工品质的决定因素。因此小麦胚乳14-3-3蛋白对淀粉合成酶调控的研究，不仅在一定程度上可以阐明14-3-3蛋白、淀粉合成酶互作机理，而且对提高小麦等粮食作物产量、改善品质也具有重要的指导意义。从小麦胚乳中克隆14-3-3基因，进行体外表达纯化。通过亲和杂交、免疫共沉淀、Far-Western等方法检测与其互作的淀粉合成酶，并通过凝胶过滤层析、凝胶阻滞、交联剂处理和标记转移方法进一步验证14-3-3、淀粉合成酶蛋白互作复合体的存在。研究14-3-3蛋白对淀粉合成酶活性的影响、磷酸化/去磷酸化和镁钙等离子对蛋白互作的影响，通过合成片段、点突变探明蛋白互作区域/位点，明确14-3-3蛋白调控淀粉合成酶的机理。选择2-4个淀粉合成酶，进行体外表达纯化，体外重组进一步验证14-3-3蛋白与淀粉合成酶的互作情况，与体内结果相印证。