以u-PA为靶向分子的重组人TRAIL特异激活抗结肠癌的实验研究

结肠癌的有效治疗一直是基础研究和临床治疗中的热点和难点。本研究基于TNF超家族成员肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）的特殊抗瘤性和尿激酶型纤溶酶原激活剂（u-PA）在结肠癌细胞膜高表达的特点，提出以u-PA为靶向分子进行结肠癌靶向治疗的新策略。在利用基因工程技术获得人TRAIL cDNA的基础上，拟通过将u-PA裂解位点序列人工添加至无活性的sTRAIL来建立一种融合蛋白，使其在高表达u-PA的结肠癌细胞表面被u-PA特异激活并快速释放，并从细胞和荷瘤鼠模型两个层面观察以u-PA为靶向分子的TRAIL特异抗瘤作用。本研究拟行的以u-PA为靶向分子的在肿瘤局部快速释放sTRAIL活性的新的结肠癌靶向治疗策略，既能解决肝脏毒性这一应用TRAIL进行抗肿瘤治疗最大的限制因素，又使其抗瘤作用具有高度靶向性，将为结肠癌的靶向治疗提供新的思路和线索，并可能为其它肿瘤治疗提供借鉴。

本研究基于TNF超家族成员肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）的特殊抗瘤性和尿激酶型纤溶酶原激活剂（u-PA）在结肠癌细胞膜高表达的特点，提出以u-PA为靶向分子进行结肠癌靶向治疗的新策略。在前期利用基因工程技术获得人TRAIL cDNA的基础上，拟通过将u-PA特异裂解位点序列人工添加至无活性的sTRAIL来建立一种融合蛋白，使其在高表达u-PA的结肠癌细胞表面被u-PA特异激活并快速释放，并从细胞和荷瘤鼠模型两个层面观察以u-PA为靶向分子的TRAIL特异抗瘤作用。 本 项 目 预 期 目 标如下：.（1）获得在C 端带有6×His标签肽和u-PA 特异裂解位点序列的融合性sTRAIL 纯品。 .（2）体外证实融合性sTRAIL酶前体蛋白经功能性u-PA 裂解后可变成有活性的sTRAIL。 .（3）证实融合蛋白可在体外共培养体系中被激活并能抑制结肠癌细胞的生长。 .（4）证实融合蛋白可在荷瘤鼠体内抑制结肠癌细胞移植瘤的生长。 .项目按预期计划顺利实施，已完成各项研究内容，得到较满意结果，具体如下：.（1）、成功获得在C 端带有6×His标签肽和u-PA 裂解位点序列的融合性sTRAIL 纯品。.（2）、体外证实了融合蛋白经功能性u-PA 裂解后可变成有活性的sTRAIL。.（3）、证实了融合蛋白可在体外共培养体系中被激活并能明显抑制两种结肠癌细胞（SW-480和HT-29）的生长。.（4）、证实了融合蛋白可有效抑制两种结肠癌细胞（SW-480和HT-29）裸鼠移植瘤的生长。同时观察到融合蛋白对荷瘤鼠肝脏功能无明显影响。.本研究成功将u-PA特异裂解位点序列人工添加至无活性的sTRAIL建立了一种融合蛋白并将其纯化，使其在高表达u-PA的结肠癌细胞表面被u-PA特异激活并快速释放，并从细胞和荷瘤鼠模型两个层面观察到以u-PA为靶向分子的TRAIL特异抗瘤作用。 本研究拟行的以u-PA为靶向分子的在肿瘤局部快速释放sTRAIL活性的新的结肠癌靶向治疗策略，既有望解决肝脏毒性这一应用TRAIL进行抗肿瘤治疗最大的限制因素，又使其抗瘤作用具有高度靶向性，将为结肠癌的靶向治疗提供新的思路和线索。.相关研究结果已在国内统计源期刊上发表论著1篇，英文文章已投稿至国外SCI杂志。项目总经费30万元,已使用28.393366万元。