基于AnnexinA5-Nlrp3通路探讨三黄泻心汤对痰浊血淤型高脂血症内皮胞膜的调节作用

Resealing of plasma membrane of endothelial cell which could prevent and treat vascular complication caused by hyperlipidaemia is a hot topic. San-Huang-Xie-Xin-Tang (SHX) which plays a main role in Chinese medicine with high effective and depressing lipid was concerned by researchers. However, the mechanism of SHX to prevent and treat early stage of vasculopathy in hyperlipidaemia was not clear. In previous study, there was proved that Annexin A5 was participated in resealing process of plasma membrane of endothelial cell. Otherwise, plasma membrane of endothelial cell was injured by risk adipocyte factors, and then endothelial Nlrp3 inflammasome was aggravated and activated. The injured of endothelial cell by risk adipocyte factors could be attenuated and the activity of endothelial Nlrp3 inflammasome could be inhibited by extractive of SHX. It indicated that the mechanism of prevention of hyperlipidaemia by SHX was related to Annexin A5-Nlrp3 inflammasome pathway. In this study, advanced techniques like finger-print to quality control the prescriptions, in vivo specific gene silencing and real-time monitor resealing process of plasma membrane et al will be used in pesticide effect of SHX and mechanism study of Annexin A5-Nlrp3 inflammasome pathway in vasculopathy caused by risk adipocyte factors. This study will provide a new basis of pharmacological mechanism of SHX to prevent and treat vascular complication caused by hyperlipidaemia, and a new basis of prevention of hyperlipidaemia in early stage by traditional Chinese medicine.

修复内皮细胞膜功能，是防治高脂血症引起早期血管内皮损伤的研究热点，三黄泻心汤作为临床重要经典降脂方剂，其防治高脂血症与修复内皮细胞膜功能是否有关仍不清楚。本人前期已证明AnnexinA5参与内皮细胞膜修复过程，且当危险脂肪因子刺激下，血管内皮细胞膜受损，导致内皮Nlrp3炎症小体危险信号加剧。而三黄泻心汤提取物可以减弱危险脂肪因子对内皮细胞损伤刺激及抑制内皮Nlrp3炎症小体的聚集及活化，提示三黄泻心汤防治高脂血症作用机制与内皮细胞膜AnnexinA5-Nlrp3炎症小体通路密切相关。本项目拟通过建立指纹图谱进行方剂质量控制，利用活体定点基因沉默及实时监测细胞膜修复技术等方法，系统深入探讨血管内皮细胞膜AnnexinA5-Nlrp3炎症小体通路在三黄泻心汤防治高脂引起的早期血管损伤中的作用。本研究为防治高脂血症早期病变提出新的作用靶点，为指导三黄泻心汤临床用药及中医治未病思想提供科学依据。

高脂是引起血管病变的重要诱因，因此三黄泻心汤作为金匮要略中经典降脂方剂而被受关注，但至目前为止三黄泻心汤是如何防治高脂血症早期血管病变仍不清楚。基于此，本项目通过采用高效液相方法建立科学的指纹图谱，鉴别有效成份，利用活体基因沉默技术及分子生物学方法，从在体动物到离体细胞进行全方位的药效及机制研究，深入探讨三黄泻心汤防治早期危险脂肪因子引起的血管损伤的重要机制。通过系统研究，我们成功并稳定建立了中药汤剂三黄泻心汤的制备条件，通过严格控制煎煮时间、过滤次数、所用容器等炮制过程，以色谱指纹图谱为质量控制标准，保证每次的水煎液的质量稳定。同时通过系统研究确定了三黄泻心汤防治早期高脂血症作用与Nlrp3炎症小体活化密切相关。成功建立了高脂血症诱导血管损伤模型，系统分析三黄泻心汤对血管内皮周围组织形态及相关内皮细胞功能的改变，同时研究三黄泻心汤对因高脂引起的内皮损伤的保护程度，并通过检测内皮细胞释放Nlrp3炎症小体相关炎性因子及相关内皮功能蛋白的变化，确定与Nlrp3通路的关系。除此之外，还发现了三黄泻心汤中的有效物质芦荟大黄素对血管内皮的保护作用与抑制ROS介导的NLRP3炎症小体密切相关。明确三黄泻心汤防治机制涉及内皮胞膜引起的Nlrp3信号通路活化。通过监测膜修复蛋白Annexin A5表达及细胞膜自我修复能力的变化，结合基因沉默技术，发现Annexin A5做为重要的膜蛋白在内皮胞膜自我修复过程中起着举足轻重的作用。基于以上发现，本项目已经发表相关研究性论文7篇，其中SCI论文5篇，发表综述2篇，参加国内外学术会议10人次，并发表相关会议摘要3篇，主持课题3项，其中包括广东省自然科学基金杰出青年基金项目1项，申请专利并获得专利申请号5项，成功进入中华中医药学会优秀青年学者科技成果汇编，并培养1名硕士研究生顺利毕业，目前仍有5名硕士研究生及2名博士研究生在读。本研究为三黄泻心汤防治高脂血症引起的血管并发症的药理机制提供新的理论依据，为指导高脂血症患者的早期防治用药及中医治未病思想提供科学依据。