水杨酸钠致耳鸣动物模型耳蜗及下丘核中囊泡谷氨酸转运体3的表达及其意义

The pathogenesis of tinnitus is still unknown. The excitement / inhibition balance disorders account for an important role in the neural mechanisms of tinnitus generated. Vesicular glutamate transporter 3 (VGLUT3) is related to the release of glutamate in the cochlea, the knockout mice of VGLUT3 is completely hearing loss. Moreover, VGLUT3 is glutamatergic neuron-specific marker, but coexist in the inhibitory neurons, which may lead to changes in inhibitory neuronal function disorders, thereby causing excitement / inhibition imbalance. In addition, our previous study found: salicylate could made the over expression of VGLUT3 in the rat spiral ganglion cells. It suggested: changes of VGLUT3 may be one of the mechanisms causing neuronal excitement / inhibition imbalance. Therefore , the present study intends to use salicylate to induce tinnitus , using auditory startle reflex inhibition to text the model, assisted with immunohistochemistry, molecular biology, morphological and electrophysiological techniques to detect the ⑴ changes of the number and distribution of VGLUT3in the cochlea and inferior colliculus ;⑵ changes of morphology and expression of ultrafine VGLUT3 in the synapse of inner hair cells and inferior colliculus synapse;⑶ a specific inhibitor administered would be used to evaluate the degree of damage caused by tinnitus, with an expectation to uncover the major principle of salicylate-induced tinnitus.

耳鸣发病率高，但发病机制未明，其中，谷氨酸（Glu）的改变可引起耳鸣，囊泡谷氨酸转运体3（VGLUT3）控制耳蜗谷氨酸释放，敲除 VGLUT3基因，小鼠听力丧失。并且，VGLUT3 同时存在于兴奋性神经元及抑制性神经元中，其改变可导致抑制性神经元功能失调，引起兴奋/抑制失衡。我们前期研究发现：水杨酸钠作用后，耳蜗螺旋神经节细胞VGLUT3表达量增强，Glu表达升高，GABA表达降低。据而推测：VGLUT3表达的改变可能是引起耳鸣的机制之一。 因此，本实验拟采用水杨酸钠诱导大鼠耳鸣，听觉惊跳反射前抑制实验进行模型检测，辅助免疫组化﹑分子生物学﹑形态学及电生理等技术，检测⑴耳蜗及下丘核VGLUT3表达量、分布改变；⑵毛细胞突触及下丘核神经突触的形态学及VGLUT3超微表达的改变；⑶应用VGLUT3抑制剂后上述指标的变化，从而探讨VGLUT3在水杨酸钠致耳鸣中的作用。

耳鸣是临床上极为常见的一种症状，其作为全身疾病或者局部疾病的一种症状，病因非常复杂。但目前尚无治疗耳鸣的有效药物和方法，原因之一就是人们缺乏对耳鸣发生机制的足够认识。因此，研究耳鸣的发生机制将有助于进一步认识耳鸣，为耳鸣的治疗提供相关的理论依据。本课题采用水杨酸钠作为耳鸣诱导剂，通过听觉惊跳发射前抑制实验筛选出耳鸣动物，检测：1.耳鸣组及对照组动物耳蜗、下丘核VGLUT3表达量及表达部位的改变；2.相关兴奋性及抑制性神经递质的变化及神经电生理变化；3.耳鸣模型内毛细胞带状突触形态及功能的改变。 发现：1. VGLUT3选择性表达在耳蜗内毛细胞、内毛细胞底部的Ⅰ型传入神经末梢、Ⅰ型螺旋神经元细胞的胞浆中；2. VGLUT3在内毛细胞及Ⅰ型传入神经末梢中的表达形式与在螺旋神经元细胞中的表达形式不一致；3. VGLUT1只表达在螺旋神经元细胞胞浆中；4.VGLUT3在大鼠耳蜗中的表达存在年龄相关性，预示其对耳蜗发育及正常功能的维持起重要作用，但其确切功能有待于进一步研究证实；5.VGLUT3在耳蜗内毛细胞表达升高可能导致耳鸣，ABR中I幅值降低与耳蜗带状突触减少相关，提示带状突触改变和耳鸣产生相关，其机制有待于进一步研究。本课题阐明VGLUT3在水杨酸钠致耳鸣中的作用，并且提出带状突触的损伤可能是耳鸣产生的重要机制。