p38MAPK表达与腹膜透析肠黏膜屏障功能障碍相关性及扶肾颗粒调控机制的研究

Peritoneal dialysis(PD) related to intestinal mucosal barrier dysfunction as the breakthrough point.Around the hypothesis that activation of p38MAPK signaling pathway in peritoneal dialysis related to reflect the intestinal mucosal barrier injury.Combined with the asthenia of both the spleen and kidney, stasis turbidity resistance for the key pathogenesis of PD bowel dysfunction.With obvious clinical curative effect of " Fu Shen Granule " as the research carrier.From the cell, molecular level, using electron microscopy, radioimmunoassay, immunohistochemistry, RT-PCR, than the detection technology of color method, using the cell culture in vitro,The observation of PD intestinal barrier function related to endotoxin, DAO, D- lactic acid, cell tight junction protein Occludin and ZO-1 distribution and rearrangement and epithelial cells, the expression of p38MAPK ,iNOSmRNA and NO.To reveal the mechanism of peritoneal dialysis related intestinal barrier dysfunction, expression and regulation of Chinese medicine function mechanism of p38MAPK on activation of p38MAPK signaling pathway and PD related intestinal mucosal barrier disorders.In order to explain the mechanism of Fushen granule in the treatment of PD related to the dysfunction of intestinal mucosa barrier, to provide new ideas for the Chinese medicine in prevention and treatment of peritoneal dialysis related intestinal barrier dysfunction.

以腹膜透析（PD）相关肠黏膜屏障功能障碍为切入点，围绕"p38MAPK信号通路活化反映PD相关肠黏膜屏障功能损伤"这一假说，结合脾肾两虚，瘀浊内阻为腹透肠道功能紊乱的病机关键，以临床疗效显著的"扶肾颗粒"为研究载体，从细胞、分子层面，采用电镜、放免法、免疫组化法、RT-PCR、比色法等检测技术，采用动物实验及体外细胞培养，对PD肠屏障功能障碍相关的内毒素等通透性指标、细胞紧密连接蛋白Occludin和ZO-1的分布和重排情况、上皮细胞内iNOSmRNA 和NO 、p38MAPK的表达，以及肠屏障障碍炎症因子的表达进行观察，揭示腹透相关肠屏障功能障碍的发生机制，探究p38MAPK信号通路活化与PD相关肠黏膜屏障障碍的相关性及中医药对p38MAPK信号表达的干预作用，以期解释扶肾颗粒治疗PD相关肠黏膜屏障功能障碍的机理，为中医药防治腹透相关肠屏障功能障碍提供新的思路。

腹膜透析患者肠道功能障碍是导致的腹膜炎及透析效能降低而终止腹透的主要原因。前期研究发现肠上皮细胞P38MAPK信号通路激活会下调紧密连接蛋白的表达，导致肠道屏障通透性增加。由此围绕“p38MAPK信号通路活化反映PD相关肠黏膜屏障功能损伤”这一假说，确立以腹透相关肠屏障功能障碍发生机制为研究核心，同时结合其病机关键－气血不足，脾肾两虚，瘀浊内阻，提出“健脾益肾，活血化浊”的治疗法则，以临床疗效显著的“扶肾颗粒”为研究对象，建立动物和细胞模型，分别从动物、细胞、分子层面，揭示腹透相关肠屏障功能障碍的特点和发生机制。.首先通过观察不同透析液浓度、剂量腹膜透析大鼠模型肠黏膜组织形态、通透性、p38MAPK及下游因子的表达，发现延长腹透时间，提高腹透液剂量和浓度对腹膜透析大鼠肠黏膜功能确有影响。随着透析剂量的增加及浓度的增加，肠黏膜屏障炎症相关因子普遍高表达，p38MAPK磷酸化水平相应增高，参与MAPK信号通路活化。研究也显示扶肾颗粒对腹膜透析肠黏膜功能障碍具有一定的保护作用，同时可以调节相应下游细胞因子达到保护作用，因此推断扶肾颗粒可能通过调节p38MAPK干预MAPK通路改善肠黏膜通透性达到保护肠屏障作用。.为验证这一结论，我们通过LPS诱导建立大鼠肠上皮细胞损伤模型，通过模拟透析对肠黏膜损伤，并引入p38MAPK信号通路特异性阻断剂，以扶肾颗粒含药血清干预。实验结果显示LPS激活的p38MAPK信号转导通路，介导了Occludin和ZO-1的表达。扶肾颗粒能够改善LPS引起的细胞屏障功能的破坏，对肠黏膜屏障有一定的保护作用，进一步验证其保护机制可能与抑制p38MAPK信号转导通路的激活，继而上调Occludin和ZO-1相关。同时完成了基于网络药理学对扶肾颗粒有效成分的分析及作用靶点、通路的预测，支持了扶肾颗粒可通过对p38MAPK通路的调节作用干预了腹膜透析肠屏障功能障碍的发生。.受本项目资助，现已发表论文3篇，投稿2篇（其中SCI论文1篇）；培养博士研究生1名，硕士研究生3名。达到预期研究目标。