内源性调控因子CREG基因对血管内皮损伤的保护作用研究

明确血管内皮损伤的自稳态调控机制，并通过有效干预，保护和恢复血管内皮功能，对多种血管疾病防治具有重要意义。CREG基因是多种组织或细胞成熟分化稳态的重要调控因子。本室前期研究发现，CREG在成熟血管内皮中高表达，在病理损伤后表达明显降低，提示其可能参与血管内皮成熟稳态调控。本研究拟制备细胞学、组织学及实验动物在体血管内皮损伤的病理模型，通过腺病毒介导CREG基因和外源性加入PLGA-NP/重组CREG蛋白方法使其在血管内皮中特异性高表达，评价CREG基因干预对血管内皮病理性损伤的保护作用，并探讨CREG基因介导的VEGF因子和PI3K/AKT信号转导通路活化在血管内皮稳态调控中的作用。这些研究工作将有助于从血管内皮自稳态调控角度，深入揭示CREG蛋白保护血管内皮损伤的病理生理意义。

血管内皮损伤和功能障碍是高血压、糖尿病、动脉粥样硬化（atherosclerosis, AS）和冠状动脉介入治疗术后再狭窄等多种血管疾病的早发病理过程。以血管内皮损伤和功能障碍作为干预靶点已成为当前血管疾病防治研究的热点之一。明确血管内皮自稳态调控机制并进行有效的干预，增强血管内皮抵御外源性损伤能力，对多种血管疾病防治具有重要的意义。人E1A激活基因阻遏子（cellular repressor of E1A-stimulated genes, CREG）基因是新报道的一个维持组织及细胞成熟分化稳态的重要调控因子。我室前期研究证实，CREG基因在成熟VECs中呈现高丰度表达；而在急性球囊损伤和高脂喂养AS动物模型等急慢性病理性损伤VECs中，CREG基因的表达显著降低。进一步研究发现，外源性转染CREG基因可以促进体外培养的人VECs增殖、游走以及对抗病理性凋亡等生物学功能。相反，通过基因沉默的方法抑制了细胞中CREG的表达后，VECs自发性凋亡现象明显增加。这些结果提示：CREG表达下调与VECs病理性损伤密切相关，并且，CREG可能是维持VECs生理稳态的重要调控因子之一。.为验证假设，阐明CREG基因在血管内皮损伤调控中的作用，本研究完成了进行下列工作：1. 应用不同致病机制的外源性炎症因子（Thrombin、oxLDL和TNF-ɑ等）刺激体外培养的VECs和离体血管组织，制备解了血管内皮病理性损伤的细胞和组织学模型；2. 应用颈动脉球囊拉伤和高脂喂养apoE-/-小鼠，分别制备动物急性和慢性血管内皮损伤在体病理模型。3. 通过腺病毒介导和外源性加入重组CREG蛋白等方法，在上述病理模型中特异性地增加CREG蛋白表达，观察CREG蛋白过表达对VECs、血管组织以及在体急、慢性血管内皮损伤的保护作用，并深入探讨了其调控内皮保护的信号通路和相关分子。本研究工作的顺利完成，为从血管内皮自稳态防御角度揭示CREG基因在血管内皮损伤中的保护作用，同时也为内皮损伤性血管疾病的防治研究提供了新的思路。