循环纤维细胞在房颤心房纤维化中的作用及ACE2-Ang(1-7)-Mas轴干预的实验研究

循环纤维细胞（circulating fibrocytes，CF）是一种骨髓来源的新型纤维细胞，其在组织器官纤维化过程中的作用正日益受到关注。我们在前期工作中观察到CF可能参与了慢性房颤心房纤维化过程，而RAS对CF可能具有调控作用。为验证这一设想，本课题拟采用慢性房颤动物模型，从整体动物和离体细胞两个水平进一步研究CF在慢性房颤心房纤维化过程中的作用及作用机制；在此基础上，采用药理学与基因干预相结合、离体机制研究与载体疗效验证相结合的方法，探讨RAS的负向调节通路ACE2-Ang(1-7)-Mas轴对CF的调控作用及可能参与的信号转导分子。期望从CF这一新的角度探索房颤的发病机制和ACE2-Ang(1-7)-Mas轴的心脏保护机制，为防治房颤提供新的思路。

经过三年研究，本项目主要研究内容得以顺利开展和完成，基本达到了预定的研究目标，并获得了2013年国家自然科学基金青年-面上连续资助项目，为进一步深入研究奠定了良好的基础。现总结如下：.1、课题组成功建立了快速心房起搏家兔慢性房颤模型和Beagel犬慢性房颤模型。改良采用了不缝扎心房肌肉的术式固定多导电极，增加了制模的成功率。.2、通过动物模型证明了骨髓起源的循环纤维细胞（circulating fibrocytes，CFs）参与了慢性房颤心房纤维化过程并起着主导作用,并进一步对CFs在心房间质分化/转分化和募集的调控机制进行了研究。该内容为本课题组首创性工作，国内外尚无相关报道。上述研究结果已写成论文投稿。其中部分内容在2010年美国心脏协会（AHA）科学年会上发表。.3、首次报道了Ang(1-7) 作为RAS关键负调节因子，通过eNOS/NO途径显著抑制了CFs的致纤维化特性，证实了申请人对Ang(1-7)抗纤维化重要作用的研究设想。相关内容已发表。.4、首次报道了低分子肝素能显著抑制体外培养的CFs定向分化为成纤维细胞和转分化为肌成纤维细胞，表现出明显的抗纤维化特性。低分子肝素干预后能显著抑制CFs中nNOS/NO信号途径，同时通过TGF-β1/Smad信号蛋白介导的下游信号级联反应，调控CFs分化过程。相关内容已发表。.5、在离体细胞水平阐明了促纤维化因子TGF-β1对CFs细胞表型和细胞功能的调控，进一步探讨NO是否是各类促纤维化或抑制纤维化因子作用CFs的关键胞内信号分子及相应的调控机制。.6、发现了不同类RAS阻滞剂对CFs的调控和房颤心房纤维化的保护存在组织特异性。采用血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)和血管紧张素Ⅱ受体1结抗剂（AT1R）对慢性房颤兔进行药物干预，发现在心房组织水平，AT1R干预组比ACEI干预组能更有效的降低心房间质纤维化、心房间质CFs数量和房颤持续时间（DAF）等指标；但在外周血水平，ACEI干预组比AT1R干预组能更有效的减轻CFs致纤维化特性。这种组织差异性的调控作用揭示了RAS尤其是心房局部RAS的复杂性，正是这些问题为该课题继续深入研究提供了新的切入点，在此基础上申请并获得了2013年国家自然科学基金青年-面上连续资助项目（81270002）。