应用PERV同源重组靶向载体构建转基因细胞模型的研究

本研究针对转基因猪研究中外源基因的随机插入往往会造成发育缺陷及效率低下等情况，拟以存在于猪基因组中的内源性反转录病毒（PERV）为对象，利用PERV两端的LTR序列构建靶向转基因载体，开展定位敲入目的基因的细胞模型研究。首先以我们构建的pPERV-GFP载体为基础，通过在5'-LTR和3'-LTR之间插入外源启动子、报告基因和正筛选标志基因neo，并在载体的3'-LTR下游插入负筛选标志基因HSK-tk，构建成pPERVneo-GFP/tk靶向载体；然后通过靶向载体在细胞内的同源重组，构建外源基因定位敲入的转基因细胞模型。其意义在于：（1）应用该靶向载体系统可以将外源基因定位整合进基因组中PERV的位点，有望为高效定点整合的转基因猪研究提供一种新的工具；（2）应用该靶向同源重组技术，导入某些抗性基因或特定遗传性疾病基因，可能为猪的抗病育种及疾病模型或模式动物的研究提供一种新方法。