α7nAChR介导100Hz电针调节免疫功能的作用研究

近年来，电针调节免疫功能的作用及其机制研究愈来愈受到广泛关注。文献报道和我们在人体、小鼠上的实验均表明电针具有调节免疫功能的作用，阿片肽和细胞因子间的相互作用介导了其调节过程，但该作用不能完全被纳络酮所阻断，说明还有其它途径参与了其中。最近发表在Nature的研究显示α7nAChR在抗炎免疫反应中扮演着重要的角色，我们的实验也发现小鼠免疫细胞上有α7nAChR的表达，给予α7nAChR抗体后，100Hz电针可明显升高小鼠NK细胞活性，提示α7nAChR参与了电针调节免疫功能的作用，但其作用机制不清楚。为此，本项目拟在已有实验结果的基础上，应用神经药理学、细胞生物学、RT-PCR、Western-blot、RIA、ELISA、共焦激光扫描等技术和方法，以α7nAChR为本研究的切入点，探讨其介导100Hz电针调节免疫功能的神经免疫学机制，为进一步明确和扩展电针的临床应用提供理论依据。

本项目以α7nAChR为切入点，探讨其介导 100Hz 电针调节免疫功能的作用机制。我们的研究结果表明：不同频率电针连续刺激对正常小鼠脾脏NK细胞活性的影响不一样，呈现频率依赖性，100Hz 电针可显著降低NK细胞活性，2/100 Hz 电针可明显升高NK细胞活性，而2Hz 电针无明显影响；不同频率电针连续刺激对环磷酰胺小鼠T细胞亚群的影响不一样，呈现频率依赖性，2Hz、100Hz 和2/100 Hz电针对外周血中CD4+及CD8+均无明显影响，而2/100 Hz 电针可明显升高CD4+/CD8+，但2Hz和100Hz 电针则没有影响；运用免疫荧光法（α7nAChR抗体）发现在小鼠腹腔液中巨噬细胞表面有α7nAChR的表达；为进一步明确α7nAChR的作用，我们分别应用了抗体和受体拮抗剂，预先给予小鼠α7nAChR抗体后，100 Hz 电针可明显增强NK细胞活性；给予小鼠不同剂量的特异性α7nAChR拮抗剂α-Bgt后，给予100Hz 电针，发现1.5和3.0μg 的α-Bgt均可明显增强NK细胞活性；100Hz 电针可明显升高小鼠的血清、延髓、下丘脑和脾脏中胆碱乙酰转移酶(ChAT)的活性，而乙酰胆碱酯酶（AChE）的活性下降；RT-PCR实验显示在小鼠的血清、延髓、下丘脑和脾脏中均有ChAT和AChE的表达；Western-blot实验显示100 Hz 电针对环磷酰胺小鼠脾脏中α7nAChR的表达有升高作用，这与100 Hz 电针对NK细胞活性的影响相一致。以上实验结果提示α7nAChR可能介导了100 Hz 电针调节免疫功能的作用，为进一步明确和扩展电针的临床应用提供理论依据。